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Eletroforese, 1º É necessário uma amostra de Dna, enzima, Dna Polimerasa,…
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1º É necessário uma amostra de Dna, enzima, Dna Polimerasa, primer, desoxirribonucleótidos(dNTP) e endesoxirribonucleótidos (ddNTP)
2º O Ddntp, ligado ao final da cadeia, impede que uma nova molécula de Dntp se ligue à cadeia de DNA, impedindo o alongamento.
3ºA amostra de DNA é distribuída igualmente em 4 tubos, tendo a mesma quantidade de Ddntps diferentes em cada tubo.
4° Estes serão aquecidos para que as fitas da cadeia se separe, o prime se liga em uma sequência de nucleotídeos específicas nas fitas simples, assim a enzima da DNA polimerase começa a produzir uma nova fita de DNA.
5° Quando um Ddntp é adicionado ao acaso na cadeia de dna pela enzima, o alongamento da cadeia para, assim serão produzidas várias moléculas de DNA de tamanhos diferentes em cada tubo.
6° Em seguida, é feito uma eletroforese em gel, sendo possível determinar a sequência de nucleotídeos.
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Separa os fragmentos de restrição, e para a separação de moléculas de RNA
Fingerprint
Sequenciamento de Sanger
Técnica de PCR
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será adicionado à amostra dos nucleotídeos retirados os reagentes. Que depois é inserida em um sequenciador que realizara a leitura das bases, tendo uma analise do genoma separadamente a partir da digitalização.
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O DNA é sequenciado
Primers o DNA polimerase,
Nucleotídeos DNTPs quimicamente modificados (não é possível a inserção de um nucleotídio, por não apresentar o terminal hidroxila)
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Nucleotídeos ddNTPs quimicamente modificados, que é o diferencial da reação.
No sequenciador de DNA, os fragmentos são separados conforme o tamanho.
conforme os fragmentos passam pelo laser, há uma excitação do fluorocromo
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