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elektrophoretische Trennverfahren Labortechnik, Sonja Gischig / BMA 20…
elektrophoretische Trennverfahren
Labortechnik
medizinische Anwendungsgebiete
klinische Chemie z.B. Protein-Aufteilung für pathologische Abklärungen
Mikrobiologie
Hämatologie z.B. Hämoglobin-Elektrophorese
Immunhämatologie
Molekularbiologie z.B. Vaterschaftstest
Grundprinzip
Stoffgemisch wird in einzelne Bestandteile aufgetrennt, aufgrund dem beweglichen, elektrisch geladenen Analyten (Proteine: DNA-, RNA-Enzyme und Lipoproteine), die unterschiedlich schnell durch ein mit Puffer getränktes Trägermaterial zur entgegengesetzt geladenen Elektrode wandern
Start beim negativen Pol (Kathode)
positiv-geladene Analyten wandern zur negativ-geladenen Kathode (Minus-Pol)
negativ-geladene Analyten wandern zur positiv-geladenen Anode (Plus-Pol)
Einflussfaktoren der Elektrophorese
Ladung des Moleküls → von der Umgebung abhängig
pH-Wert der Umgebung → abhängig von Pufferauswahl
Grösse → abhängig von der Denaturierung (des Proteins)
Beschaffenheit des Trägergels → abhängig von der Gel-Konzentration
Stärke der angelegten elektrischen Spannung →abhängig der eingestellten Volt
Temperatur der Umgebung → abhängig von der Kühlung und Stromstärke
Elektrophoresen-Funktionalität
Es gibt 5 verschiedene Kontrollmechanismen.
Protein-, DNA- oder RNA-Leiter
enthaltenen Bestandteile sind den durchführenden Personen bekannt.
Positivkontrolle/-n
Enthält nur einen ganz bestimmten Analyten, dessen Bande nach der Auftrennung deutlich erkennbar sein muss
.
Negativkontrolle
Enthält keine Analyten und es dürfen nach erfolgter Auftrennung keine Banden sichtbar sein. Oft wird Reinstwasser als Negativkontrolle eingesetzt.
Loading Dye
Es enthält ein negativ geladenes Farbmolekül, welches sich schneller fortbewegt. Damit kann geprüft werden, ob die Stromkabel korrekt angebracht wurden.
Es erhöht zudem die Dichte für den Ladungsprozess.
Bläschenbildung an den Platinelektroden
Sobald Strom fliesst, muss an den Platinelektroden eine gleichmässige Bläschenbildung (siehe untenstehende Abbildungen) erkennbar sein.
verschiedenen Elektrophorese-Arten
klassische Variante – Die Träger- Elektrophorese
Klassische Gel-Elektrophorese
Serumprotein-Elektrophorese:
ist eine medizinische Laboruntersuchung, bei der die Serumproteine mittels einer nativen Gelelektrophorese einem Agarose-Gel aufgetrennt werden
Immunfixation-Gel-Elektrophorese:
können monoklonale Gammopathien genauer typisiert werden. Häufig findet sich monoklonales IgG, IgA oder IgM. Möglich sind auch nur freie Leichtketten κ oder λ.
Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gel-Elektrophorese (SDS-PAGE)
eine analytische Methode der Biochemie zur Trennung von Stoffgemischen nach der Molekülmasse in einem elektrischen Feld.
trägerfreie Elektrophorese (Phase 4)
Sonja Gischig / BMA 20-23 / 17.05.2021