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BIOLOGIA MOLECOLARE - Coggle Diagram
BIOLOGIA MOLECOLARE
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CLONAGGIO MOLECOLARE
NECESSARIO:
- frammento di DNA
- specifici enzimi di restrizione
- plasmidi (vettori) in grado di inserirsi nella cellula
- cellule batteriche modificate: con membrana permeabile al plasmide (pori temporanei)
- DNA-ligasi
PROCEDIMENTO:
- inserire il DNA nel vettore: i due DNA sono stati tagliati con lo stesso enzima di restrizione, stesse stremità adesive unite dalla DNA-ligasi
- trasfezione (negli eucarioti) / trasformazione (nei procarioti): il vettore ricombinante viene introdotto in una cellula ospite che si moltiplichi velocemente, ottenendo tanti cloni del segmento di DNA
- per distinguere le cellule batteriche trasformate, il vettore include un gene reporter (marcatore)
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