Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
Hibridación de ácidos nucleicos y PCR - Coggle Diagram
Hibridación de ácidos nucleicos y PCR
Southern blot
El protocolo fue desarrollado por Edward Southern
Es un método que se basa en la aplicación de dos procesos fundamentales: la desnaturalización o separación de las cadenas complementarias del ADN y la hibridación de dos cadenas complementarias.
Elaboración de huellas genéticas.
Estudio de mutaciones estructurales (traslocaciones, deleciones, inserciones, inversiones).
Detección de secuencias adquiridas.
Detecta la presencia de una secuencia de ADN en en una mezcla compleja de ácido nucleico.
Emplea la técnica de electroforesis en gel de agarras con el fin de separar en base a la longitud de los fragmentos de ADN para posteriormente por una transferencia a una membrana en la cual se efectúa la hibridación de la sonda.
Es una herramienta importante para proporcionar un diagnóstico preciso de la enfermedad,e identificar aislamientosque permitan caracterizar la diversidad de cepas en diferentes huéspedes, en el ambiente y en diferentes regiones geográficas
Northern blot
Detección de secuencias específicas de RNA.
Es una técnica de detección de moléculas de ARN de una secuencia dada dentro de una mezcla compleja, el procedimiento utilizado en esta técnica es la misma que en la Southern blot, sin embargo, en Northern blot busca secuencias en el ARN en lugar del ADN.
Aislamiento de RNA
Desnaturalizar el RNA
Separar por electroforesis desnaturalizante
Transferir a membrana de nitrocelulosa o nylon 5. Hibridar con sonda específica
Revelar con placa de Rayos X ó pantalla de fosforimager
Pretende observar un patrón particular de la expresión genética entre tejidos, órganos, estadios del desarrollo, etc.
Mostrar sobre expresión de oncogenes y la desregulación de genes superiores humerales en células cancerosas cuando son comparadas con tejidos normales,
Variación en el tamaño del producto de un gen puede además indicarnos errores en el proceso de transcripción.
Conocer la secuencia e incluso determinar que región del ARN ha sido decepcionada.
Detecta pequeños cambios en la expresión de genes que los microarrays no pueden identificar.
Degrada la muestra por ARNsas
PCR
La especificidad de la PCR depende, fundamentalmente, de la temperatura empleada en la fase de hibridación y de la cantidad de iones divalentes que se incorporan a la reacción.
La reacción en cadena de la polimerasa es una reac- ción enzimática in vitro que amplifica millones de veces una secuencia específica de ADN durante varios ciclos repetidos en los que la secuencia blanco es copiada fielmente.
Kary Mullis
Utilizó la PCR para la amplificación del gen de la b-globina humana y el diagnóstico prenatal de la anemia falciforme, desde entonces la PCR ha revolucionado todos los campos que estudian y manipula los ácidos nucleicos.
Pruebas de paternidad
Análisis forenses
Diagnosticar enfermedades hereditarias
identificación de patógenos
Cada ciclo comprende la desnaturalización de la doble hebra de ADN y la síntesis de la una nueva cadena de ADN por cada cadena haya presente.
Existen distintos tipos de PCR
La PCR es una técnica muy potente que se ha vuelto indispensable en cualquier laboratorio de biología molecular por sus numerosas aplicaciones, la importancia y trascendencia de la PCR se puede ver en que es una de las pocas técnicas que han logrado salir del mundo restringido de los laboratorios y convertirse en conocida del gran público bien a través de series de televisión o a través de los diagnósticos rutinarios de hospitales.
