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DIAGNOSTICO PARASITOLOGICO, UNIV. CHAMBI RODRIGUEZ GRISEL DANITZA GRUPO 7…
DIAGNOSTICO PARASITOLOGICO
DIAGNOSTICO DE LAS PARASITOSIS
Exámenes parasitoscópicos de
cavidades
En este caso se trata de la obtención de secreciones (vaginales y uretrales)
Exámenes coproparasitoscópicos
(CPS)
De acuerdo con el momento de su realización
Pueden ser inmediatas, como los CPS en fresco, y mediáticas, es decir, que no se realizan de inmediato, utilizando o no una solución conservadora
Según el tipo de procesamiento de la muestra
Pueden ser por examen directo macroscópico o microscópico. Dentro de los estudios microscópicos se encuentran aquellos donde la muestra se estudia directamente (examen directo en fresco)
Por la aplicación de colorantes
Se clasifican en los que utilizan una preparación húmeda y en los que la tinción es más elaborada, pues requiere usar agentes fijadores y deshidratantes de la muestra.
Por su expresión numérica
pueden ser cualitativos o cuantitativos.
Otro tipo de examen
Que tiene relación con parásitos del tubo digestivo es el raspado anal y perianal, y otro más es el examen de contenido duodenal obtenido por sondeo o por medio de la cápsula duodenal.
TÉCNICAS INMUNOLOGICAS PARA EL ESTUDIO DE ANTÍGENOS PARASITARIOS
Clasificación de los antígenos parasitarios
Antígenos solubles excretados o secretados
excretados o secretados al medio de cultivo son derivados de procesos metabólicos del parásito y fueron la fuente de antígenos de protozoarios, nematodos, cestodos, artrópodos y otros.
Antígenos sintéticos
se obtienen por síntesis química en un laboratorio cuando ya se conoce la secuencia de aminoácidos del péptido o proteína antigénica contra la cual se dirige la mayoría de los anticuerpos producidos por el huésped.
Antígenos solubles extraídos del parásito (somáticos
)
no son secretados por los parásitos, sino que forman parte estructural de ellos y es necesario utilizar procedimientos de extracción química para obtenerlos
Antígenos recombinantes
son en general de naturaleza peptídica o proteica y se originan con técnicas de ácido
desoxirribonucleico (dna) recombinante; para ello, el gen que codifica para un antígeno de un parásito se expresa en bacterias como E. coli o levaduras metilotróficas como Pichia pastoris.
Utilidad médica diagnóstica de los antígenos
parasitarios
c) Estudiar los factores de virulencia de los parásitos y conocer los mecanismos de patogenia de las lesiones celulares o tisulares durante la interacción con el huésped
b) Identificar los antígenos que inducen protección y que
pueden ser útiles en la vacunación.
d) Diseñar o mejorar las técnicas diagnósticas existentes para confirmar la presencia de parásitos en seres humanos y en animales.
a) Establecer el diagnóstico de infección reciente o antigua
en algunas parasitosis
e) Identificar moléculas con potencial terapéutico en autoinmunidad e inflamación.
Introducción
El fundamento de las técnicas para el estudio de los antígenos parasitarios, desde sus orígenes hasta el momento actual se basa en dos estrategias
a) identificación o cuantificación de anticuerpos
contra componentes de los parásitos
b) identificación directa o indirecta de los parásitos o alguno de sus componentes
Las técnicas para el estudio de antígenos parasitarios evolucionaron a medida que aparecieron nuevos métodos para aislar, purificar y determinar su estructura química
TÉCNICAS INMUNOLOGICAS PARA EL ESTUDIO DE ANTÍGENOS PARASITARIOS
Técnicas para identificar anticuerpos antiparásitos
Contrainmunoelectroforesis
Consiste en poner la muestra de suero con los anticuerpos al lado de un gel y el antígeno o los antígenos parasitarios enfrente.
Pruebas inmunoenzimáticas
las pruebas inmunoenzimáticas han contribuido tanto a la investigación como al servicio médico diario, ya que se trata de técnicas más sensibles que todas las ya descritas en los párrafos anteriores.
Aglutinación
Esta técnica es más sensible que la difusión, y consiste en hacer reaccionar los antígenos parasitarios y los anticuerpos sobre partículas de látex o sobre eritrocitos.
Prueba Western blot o de
inmunoelectrotransferencia
En esta técnica se hace reaccionar el suero o plasma de un paciente con una tira de nitrocelulosa que contiene uno o más antígenos parasitarios
Inmunodifusión
La inmunodifusión simple o doble se basa en la reacción de antígenos y anticuerpos en un medio sólido, como el gel de agar o de agarosa.
Inmunofluorescencia
En esta técnica se pone en contacto el suero del paciente con los parásitos muertos y preservados o sus antígenos, y luego de lavar se añade la fluoresceína conjugada o unida a un anticuerpo antiinmunoglobulina humana
Problemas y limitaciones de las técnicas para estudiar antígenos parasitario
s
Falta de especificidad
Se debe en buena medida al uso de extractos antigénicos crudos, es decir, no purificados y, por tanto, no definidos en términos químicos. La presencia de antígenos o proteínas contaminantes del huésped de donde se obtuvieron los parásitos también contribuye a la falta de especificidad. Incluso el cultivo de los parásitos se puede contaminar en el laboratorio con proteínas o componentes del medio de cultivo.
Falta de sensibilidad
Las pruebas de aglutinación de látex y eritrocitos, aunque permiten conocer el título de anticuerpos contra algunos antígenos parasitarios y fueron de cierta utilidad en el pasado, no reúnen las características de especificidad, sensibilidad, reproducibilidad y estabilidad que se requieren en el laboratorio clínico moderno, por lo cual han caído en desuso.
Ejemplos clínicos de la aplicación de las técnicas
modernas para estudiar antígenos y anticuerpos
Infección por Toxoplasma gondi
i
El uso de antígenos químicamente puros y bien caracterizados, como en este caso, no evita los problemas de reacciones cruzadas con infecciones por microorganismos relacionados desde el punto de vista de los antígenos.
Amibiasis humana
En el estudio de los antígenos de E. histolytica, como en el caso de muchos otros parásitos, se utilizó inmunofluorescencia, contrainmunoelectroforesis y hasta hemaglutinación.
Neurocisticercosis
Peralta y colaboradores encontraron recientemente que una glucoproteína de 14 kDa obtenida de Taenia crassiceps puede sustituir a los antígenos de Taenia solium en las pruebas elisa
y Western blot. Estos investigadores hallaron 100% de concordancia en los resultados con ambas técnicas cuando emplearon esta proteína de 14 kDa.
Otros usos de las técnicas
inmunológicas
Algunas de las técnicas y estrategias no sólo se aplican al diagnóstico de enfermedad parasitaria, sino que también se emplean en el aislamiento de antígenos puros de parásitos, como en el caso del uso de anticuerpos monoclonales.
Triquinosis
Los estudios sugieren que este antígeno está involucrado en la respuesta protectora intestinal a la larva del parásito, pues debido a que es altamente inmunogénico, es un fuerte candidato a vacuna.
DESCRIPCIÓN DE LAS TECNICAS
Examen de flotación con salmuera
La muestra se homogeneiza en una pequeña cantidad de salmuera, enseguida se hace la suspensión de tal manera que llegue hasta el borde del frasco, se deja reposar 15 a 30 minutos y se recolecta el material flotante con un cubreobjetos, en donde se podrán identificar las formas parasitarias.
Examen CPS de concentración por
centrifugación/flotación
La técnica en sí consiste en homogeneizar con agua de la llave una pequeña porción de materia fecal; luego se centrifuga y se lava una o dos veces, entre las cuales se decanta el líquido sobrenadante; el último botón se homogeneiza con la solución de sulfato, se vuelve a centrifugar y se toma el sobrenadante con un asa de alambre.
Examen CPS directo en fresco
En una de ellas se utiliza la solución salina isotónica
En la otra se usa solución yodo-yodurada (lugol)
Tamizado
En esta técnica se utilizan tamices de diferentes mallas por las
cuales se hace pasar el producto biológico (materia fecal).
Examen CPS de sedimentación
simple en copas
Es una técnica indicada para los casos en que se requiere diagnosticar fasciolosis, aunque se pueden encontrar otros tipos de huevos de helmintos e inclusive quistes; sin embargo, son más prácticas las técnicas ya descritas
Examen CPS de concentración por sedimentacion- centrifugacion o de Ritchie
Se le conoce en los laboratorios de diagnóstico como técnica del formol éter
Se utiliza una solución de formalina al 10%, la cual sirve para fijar las formas parasitarias y el éter para liberarlas. Es recomendable la utilización de tubos de centrífuga cónicos de 15 ml, lo que hace que la técnica no sea muy popular por la carencia de los mismos.
Metodos cuantitativos
Examen CPS cuantitativo por dilución
Es conocido en todo el mundo como técnica de Stoll; en ella se emplea una solución de hidróxido de sodio 0.1 N (décimo normal).
Método CPS cuantitativo del frote
grueso o de Kato-Miura
La técnica original y sus variantes utilizan cubreobjetos de celofán, humedecidos previamente en una solución de verde de malaquita y glicerina, para que se impregnen.
Método CPS cuantitativo del frote
grueso o Kato-Katz
Además de la malla de alambre se utiliza un cartón grueso de 3 mm de grosor con un orificio de 6 mm de diámetro, por donde se hace pasar la muestra previamente tamizada en la malla de alambre
Metodos diversos
Cultivo de heces en papel filtro de
Harada-Mori
Consiste en colocar en tubos de 25 × 200 mm una tira de papel filtro en la que se colocó la muestra a todo lo largo de la misma mediante un aplicador de madera.
Método de la caja de Petri
Este método es muy sencillo y se facilita la identificación en forma directa en el líquido de la caja de Petri, de las larvas mediante una lupa potente.
Concentración de larvas por termo e
higrotropismo
En este método se usa un aparato conocido como de Baermann, construido con un soporte universal donde se monta un embudo con una tela de alambre y una gasa..
Cultivo de heces en arena o carbón
Consiste en mezclar la materia fecal con una porción aproximadamente igual de arena o carbón en polvo, y colocar todo homogeneizado con agua en una caja de Petri.
Tinciones
Método del raspado perianal con cinta
de celofán adhesiva
Para este método se utiliza un abatelenguas en donde se coloca la cinta adhesiva con el pegamento hacia el exterior. Se expone la región anal y mediante este dispositivo se hace un raspado de toda la zona. Enseguida se coloca la cinta sobre un portaobjetos y se examina con el microscopio.
Métodos para diagnosticar
parasitosis cavitarias y tisulares
Frote de sangre
Método útil para identificar parásitos en sangre como hemoflagelados y Plasmodium spp.
Gota gruesa
Está indicado sobre todo para el diagnóstico de paludismo; la clave de una gota gruesa bien hecha está en la hemólisis completa de los glóbulos rojos para que aparezcan los parásitos desnudos.
Examen en fresco de sangre periférica
Se coloca una gota de sangre obtenida por punción en un dedo, con una lanceta desechable y estéril; se le pone un cubreobjetos y se examina con seco fuerte.
Concentración de microfilarias
es útil para la identificación de microfilarias (Mf) en sangre periférica.
Frote de secreción vaginal o uretral
Método que puede ser utilizado para confirmar el diagnóstico de tricomoniasis
Método de Strout para diagnosticar la
enfermedad de Chagas
Es una técnica de concentración de hemoflagelados
Xenodiagnóstico
Desde el punto de vista etimológico, el nombre de este procedimiento significa “diagnóstico con el extraño” o “extranjero”; y su principal uso es para diagnosticar la enfermedad de Chagas
Triquinoscopia
Método utilizado sobre todo para regular la parasitosis en rastros
Examen en fresco de secreciones de
cavidades
Los exámenes en fresco se hacen con una suspensión del raspado de la base de los dientes para las dos primeras especies y del exudado vaginal de la última. De la suspensión se toma una gota, se cubre y se observa al microscopio a seco fuerte.
Digestión artificial
Método para efectuar el diagnóstico de triquinosis.
Biopsias
Impronta
Consiste en utilizar una pequeña porción del tejido por investigar, con el que se hace la impresión en portaobjetos, se deja secar, se fija con metanol y es teñido con Giemsa o Wright.
Cultivos
los cultivos se utilizan para todos los casos en que se requiere confirmar un diagnóstico o bien para investigación
Método de la biopsia para identificar
microfilarias en la piel
Se utilizan una hoja de bisturí y unas pinzas, con las cuales se toma una pequeña porción de piel del hombro o de la zona escapular, se jala un poco y se hace un corte superficial de manera que no sangre
Pruebas diagnósticas rápidas
se usan en algunas enfermedades infecciosas, ya que permiten obtener resultados en un tiempo muy corto en el consultorio y en presencia del paciente.
Problemas de diagnóstico
Uno de los centros de referencia a los cuales se puede recurrir cuando no se cuenta con los recursos para establecer el diagnóstico de cualquier enfermedad parasitaria
Diagnóstico molecular
Este tipo de diagnóstico se basa en un grupo de técnicas en las que se amplifica el ácido desoxirribonucleico (DNA) correspondiente a fragmentos de genes o genes completos.
Estudios de gabinete
Los estudios de gabinete son auxiliares valiosos en algunas parasitosis tisulares, como la cisticercosis o la hidatidosis
Diagnóstico inmunológico
Las directas permiten la identificación de antígenos parasitarios, y es por medio de las indirectas que se determina la presencia de anticuerpos y la respuesta celular del huésped al parásito.
Algunas de las técnicas indirectas, como la intradermorreacción de Casoni o la de Bachmann han quedado en desuso, mientras que la de Montenegro para la Leishmaniasis cutánea sigue vigente.
DIAGNOSTICO DE LAS PARASITOSIS
INTRODUCCION
El diagnostico de las parasitosis es uno de los complementos necesarios para llevar a cabo, en forma adecuada y oportuna el tratamiento de las mismas
UNIV. CHAMBI RODRIGUEZ GRISEL DANITZA
GRUPO 7