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Instrumentacion, Referencia :F. James Holler, Stanley R. Crouch, (2014),…
Instrumentacion
Principales componentes de un instrumento de HPLC
Filtro
Jeringa de purga
Regulador de contrapresión
Bomba
Transductor de presión
Reservorios de disolventes
Válvula de inyección, de retención de salida y dosificación de disolvente
columna
Reservorios de fase móvil y sistemas de tratamiento de disolventes
Elución en gradiente
Se utilizan 2 sistemas de disolventes que difieren de manera significativa en polaridad y cuya composición es variada durante la separacion
La elución en gradiente suele mejorar la eficiencia de separacion
Elución isocrática
Mezcla de disolventes de composicion constante
Instrumentos modernos de HPLC están equipados con válvulas de dosificación que introducen líquidos de 2 o mas reservorios a velocidades que se pueden variar de manera continua
Los gases disueltos pueden producir velocidades de flujo no reproducible y ensanchamiento de banda
Se pueden eliminar por medio de:
Dispositivo para agitar o calentar
Sistema de burbujeo
Sistema de destilación
Sistema de bombeo de vacío
Columnas para HPLC
Columnas analiticas
veloces y consumen un mínimo de disolvente
Precolumnas
2 precolumnas
columna de desperdicios
Columna de protección
Control de temperatura de la columna
Mantener temperatura constante y a temperatura ambiente
Empacamientos de columna
partículas peliculares
partículas porosas
Detectores para HPLC
No necesita tener un intervalo de temperatura grande
Debe tener un volumen interno pequeño (volumen muerto)
Para minimizar el ensanchamiento de banda adicional de columna
Detector debe ser pequeño y compatible con el flujo de liquido
El detector utilizado dependerá de la naturaleza de la muestra
Detectores mas utilizados para cromatografia liquida estan basados en la absorcion de radiacion ultravioleta visible
Sistemas de bombeo
Requerimientos de bombas
Generación de presiones de mas de 600 psi
Salida libre de pulsos
Velocidades de flujo de 0.1 a 10mL/min
Reproducibilidades de flujo relativas de 0.5% o mejores
Resistencia a la corrosión por una variedad de disolventes
principales tipos de bombas
Bomba tipo jeringa impulsadas por tornillo
Capacidad relativamente baja, poco prácticas al momento de cambiar disolventes
Bomba tipo émbolo
se llena y se vacía mediante el movimiento hacia atrás y hacia adelante de un pistón
Bomba tipo oscilante
Bomba de doble cabeza
Sistema de inyección de muestras
Asas de muestra
son capaces de permitir la elección de tamaño de muestras en un intervalo que va de 1 a 100 uL o mas
Inyectores automaticos
Introducen volúmenes variables de manera continua a partir de contenedores en el sistema de muestreo automatizado
Equipo de cromatografía
Es necesario bombear presiones de varios cientos de atmósfera para alcanzar velocidades de flujo razonable para los empacamientos con partícula.
Considerando el equipo más elaborado y más costoso
Referencia :F. James Holler, Stanley R. Crouch, (2014), "Fundamentos de Química Analítica", (novena edición), México, D.F. Learning Editores, S.A de C,V Cengage Learning, Inc. Cap.13 "Valoraciones en química analítica".