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Cromatografía líquida de alta resolución, Estephani Alejandra Toc Martinez…
Cromatografía líquida de alta resolución
Instrumentación
Es necesario bombear presiones a varios cientos de atmósferas para alcanzar flujo razonable para los empacamientos de partículas, 3-10 um las cuales son comunes en la cromatografía líquida moderna.
Sistema de bombeo
Requerimientos para las bombas de HPLC
Generación de presiones de más de 600 psi (lb/in2)
Salida libre de pulsos
Velocidades de flujo de 0.1a 10 mL/min
Reproducibilidades en flujo relativas de 0.5%
Resistencia a la corrosión por una variedad de disolventes
Principales tipos de bombas
Bombas tipo jeringa impulsadas por tornillos
Producen una salida libre de pulsos, cuya velocidad se controla con facilidad, capacidad relativamente baja y poco prácticas para cambiar disolventes.
Bombas de tipo émbolo
Consiste en una pequeña cámara cilíndrica que se llena y se vacía mediante el movimiento hacia atrás y hacia adelante de un pistón. Alta presión de salida, facilidad para adapatarlas a la elución de gradiente y velocidades de flujo constante.
Muchos sistemas comerciales están equipados con dispositivos controlados por computadora para medir la velocidad de flujo constante mediante la caida de presión a través de un restrictor localizado en la salida.
Sistemas de inyección de muestras
El método más utilizado para introducir las muestras en cromatografía líquida se basa en una asa de muestras.
Parte integral de los equipos para cromatografía líquida y tienen asas intercambiables capaces del tamaño de muestra en un intervalo de 1 a 100 uL o más.
La reproducibilidad de las inyecciones con un asa de muestreo es de unas décimas de un % relativo.
Reservorios de fase móvil y sistemas de tratamiento de disolventes
Los equipos de HPLC estan equipados con uno o más reservorios de vidrio que contienen mínimo 500 mL de disolvente.
Los gases disueltos pueden producir veolocidades de flujo no reproducibles y ensanchamiento de banda; se pueden eliminar en un bombeo al vacio, destilación, dispositivo para agitar o calentar.
Burbujeo: sistema en el que los gases disueltos se eliminan de la disolución por medio de pequeñas burbujas de un gas inerte que no es soluble en la fase móvil.
elución isocrática: disolvente o mezlca de disolventes de composición constantes.
Elución en gradiente: se utilizan dos sistemas de disolventes que difieren de manera significativa en la polaridad y la composición varia durante la separación. (escalonada)
Las proporciones de los disolventes varia de manera preprogramada, a veces de manera continua y a veces en una serie de pasos.
Columnas para HPLC
Columnas analíticas
Partículas de empacamiento 5 um, generan 40,000 a 70,000 platos/m
Precolumnas
Reservorio de fase móvil
de despericios
Columna de protección
previene impurezas
Control de temperatura de la columna
Temperatura ambiente hasta 150°C
Empacamiento de columna
Partículas peliculares
Partículas porosas
Estephani Alejandra Toc Martinez
Skoog, Douglas A. Fundamentos de química analítica. Vol. 2. Vol. 2. Reverté, 2020. Disponible en:
https://books.google.es/books?hl=es&lr=&id=8LP1DwAAQBAJ&oi=fnd&pg=PR5&dq=quimica+de+skoog&ots=SACEgrDIi8&sig=0j0fymBNhKkMKad5MwiEGRy4EQU#v=onepage&q=quimica%20de%20skoog&f=false