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Cromatografía líquida de alta resolución, Sistemas de bombeo: Los…
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Sistemas de bombeo: Los requerimientos para las bombas utilizadas en cromatografía líquida incluyen:
- La generación de presiones de más de 6000 psi (lb/in2)
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- velocidades de flujo de 0.1 a 10 mL/min
- reproducibles de flujo relativas de 0.5% o mejores
- resistencia a la corrosión por una variedad de disolventes.
Se utilizan dos tipos de bombas en los instrumentos de HPLC: Las bombas tipo jeringa impulsadas por tornillos y las bombas de tipo émbolo.
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Reservorios de fase movil y sistemas de tratamiento de disolventes:
Los instrumentos modernos de hplc están equipados con uno o más reservorios de
vidrio, cada uno de los cuales contiene un mínimo de 500 mL de disolvente. Generalmente se toman precauciones para remover los gases disueltos y el polvo de los líquidos.
La elución en gradiente en HPLC es aquella en la cual la composición de dicolvente se cambia de manera continua o en una serie de pasos (de manera escalonada).
El burbujeo es un proceso en el que los gases disueltos se eliminan de un disolvente por medio de burbujas de un gas inerte e insoluble.
La elición isocrática en HPLC es aquella en la cual la composición de disolvente permanece constante
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Columnas para HPLC: Las columnas para cromatografía líquida suele construirse de tubería de acero inoxidable, auque en ocasiones también se utiliza tubería de vidrio o de polímeros, tales como la polieterercetona (PEEK).
Columnas analíticas:Siempre se utilizan columnas rectas. Las columnas más utilizadas tienen de 10 a 15 cm de largo,4.6mm de diámetro interno y están empacadas con partículas de 5um.
Precolumnas:
Se utiliza una columna de desperdicios entre elcontenedor de la fase móvil y el inyector para acondicionar la fase móvil.
Una columna de protección entre el inyector y la columna analítica remueve partículas y otras impurezas del disolvente.
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Control de temperatura de la columna: Para algunas aplicaciones no es necesario tener un control estricto de la temperatura y las columnas se operan a temperatura ambiente.
Los instrumentos comerciales más modernos están equipados con calentadores que controlan la temperatura de las columnas en un intervalo que va desde unas décimas de grado con respecto a la temperatura ambiente hasta los 150°C.
Empacamientos de columna: Se utilizan dos tipos de empacamientos en la HPLC: partículas peliculares y partículas porosas.
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Detectores para HPLC: Un detector de HPLC debe tener un volumen interno pequeño (volumen muerto) para minimizar el ensanchamiento de banda adicional de columna.
El detector debe ser pequeño y compatible con el flujo de líquido.
Por desgracia, no existe ningún sistema de detector universal altamente sensible para cromatografía líquida de alta resolución, así que el detector utilizado dependerá de la naturaleza de la muestra.
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Referencia bibliográfica:
Skoog, Douglas A., Donald M. West, F. James Holler y Stanley R. Crouch. Fundamentos de química analítica. 9ed. México: Cengage Learning Editores, S.A. de C.V; 2015.
Universidad Mariano Gálves de Guatemala
Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud
Nutrición clínica
Química analítica
Andrea Michelle Villafuerte Aguirre
208 19 1139
