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Métodos Analíticos de Microbiologia de Alimentos: Preparo de Amostras e…
Métodos Analíticos de Microbiologia de Alimentos: Preparo de Amostras e Diluições
Cuidados no processo de coletas de amostras
Coleta de amostras
Ensaios biológicos
Quantificação de microrganismos presentes na amostra
Recipiente previamente autoclavado
Primeiro preparar o recipiente, para depois realizar a coleta
O responsável pela coleta deve estar portando todos os EPIs, para evitar a contaminação cruzada
Assepsia das mãos
Máscara
Realizar a assepsia do local para onde a amostra será enviada, como o laboratório, bancadas, utensílios que serão utilizados, etc
Microrganismos estão presentes em todas as partes
Ar
Terra
Água
Superfícies
Possível contaminação da amostra
Análise da amostra
Desintegrar a amostra
Misturar a amostra
Após esses procedimentos, a amostragem estará pronta a análise
Pesagem de acordo com o Protocolo para haver a representatividade do todo
25g de amostra no estado sólido
Maximizar a estação dos microrganismos presentes na amostra no diluente;
Utilizar sacos esterilizados e pesar 25g de amostra;
Anotar o valor para realizar o cálculo ao final do processo
Fechar o saco para que não haja contaminação cruzada com o ar, por exemplo;
Colocar os 225mL de água peptonada no saco com os 25g da amostra (flambar a boca do Becker, para evitar contaminação antes de colocar o líquido dentro da amostra);
Homogeneizar o conteúdo através do homogeneizador por 2 minutos na velocidade 3;
Após a homogeneização, completar a diluição até chegar numa diluição 1/1000;
Utilizar pipetas nos processos a seguir
Pegar 1mL da amostra e inserir no tubo de ensaio que possua 9mL de água peptonada (chegando na diluição 1/100. Então, pegar 1mL desse conteúdo e diluir novamente num tubo de ensaio com 9mL de água peptonada, finalmente chegando na diluição 1/1000; homogeneizar sempre o conteúdo através da agitação;
Assim, haverá maior segurança em todo o resultado;
Após estes procedimentos, inicia-se o ensaio biológico.
25mL de amostra no estado líquido
Utilizar a pipeta;
Adicionar no Becker, com diluição 1:10 (25mL da amostra diluída em 225mL de água peptonada = 250mL);
Diluente permite que ao final do ensaio tenha uma contagem mais exata, havendo menor número de organismos com uma contagem mais segura.
Trabalhar SEMPRE "abraçando" o fogo, para evitar contaminação de microrganismos externos
Amostragem
Deve ser representativa;
Requer muita atenção para evitar contaminação;
Necessita de recipientes esterilizados.