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Aulas Práticas Demonstrativas - Coggle Diagram
Aulas Práticas Demonstrativas
Contagem de mesófilos aeróbios totais
Pesagem
Preparo das diluições
Água Salina Peptonada
Tampão Fosfato
Água Peptonada 0,1% (PEP)
Citrato de Sódio 0,9%
Inocular 1mL diluição no meio de cultivo em até 30 minutos após preparo da diluição ( 25g amostra de todas as partes da embalagem+ 225mL PEP)
realizar diluições 10-⁴, 10-⁵, 10-⁶ e homogeneizar
Semeadura (realizar em câmara de fluxo laminar ou com bico de Bunsen, após, incubar entre 35º a 37º placas invertidas por 48h)
Semeadura em superfície (aeróbios)
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Semeadura em profundidade (aeróbios e naeróbios)
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Observação de crescimento nas placas
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Análise de Salmonella sp.
Pré enriquecimento
Enriquecimento seletivo
Isolamento em Agar seletivo e diferencial HE / XLD / BPLS
Identificação presuntiva (triagem e testes bioquímicos)
Caracterização antigênica dos isolados
Triagem
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Triagem por TSI, LIA ou uréia
Testagem por Indol, VM, VP, Citrato, Motilidade,Malonato, Dulcitol
Identificação sorológica
35ºC por 24h
Meios inoculados através de estriamento
Promove crescimento de colônias típicas
Agar BPLS colônias rosadas indicando crescimento de Salmonella; colônias amareladas indicam crescimento de fermentadores de lactose como E.coli
Agar XLD colônias rosadas ou pretas escuras indicando crescimento de Salmonella; colônias amareladas indicam crescimento de fermentadores de lactose como E.coli
Agar HE Salmonella e Shigella não fermentam lactose
Agar Salmonella Shigella colônias pretas indicam crescimento de Salmonella e Shigella e colônias rosadas indicam crescimento de fermentadores como E. coli
Selecionar 5 colônias típicas para transferir para Agar BHI, após, resalizar testes bioquímicos e sorológicos
Caldo Rappaport Vassiliadis 41,5ºC por 24h - bacteriostático e inibe crescimento de bactérias nessa temperatura
Caldo Tetrationato 37ºC por 24h - restrige desenvolvimento de Coliformes e desenvolvimento de Proteus spp.
35ºC por 24h
Permite crescimento de Salmonella, inibe a microbiota acompanhante
Pesagem de 25g ou 25mL de amostra adicionada em 225mL de meio enriquecedor (PEP) ou caldo lactosado
Importante para recuperar microorganismos injuriados
35ºC por 24h
Contagem de B. cereus presuntivo
Método horizontal para enumeração presuntiva Bacillos cereus
Contagem de colônias a 30º ISO 7932:2016
Pesagem
Preparo das diluições
Inocular 1mL diluição no meio de cultivo ( 25g amostra de todas as partes da embalagem+ 225mL PEP)
Semeadura em superfície (realizar em câmara de fluxo laminar ou com bico de Bunsen, após, incubar a 30º a 32º C placas invertidas por 24h -48h
Escolher 5 colônias típicas para fazer teste de hemólise em ágar sangue
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MYP seletivo e diferencial
Agar sangue meio de hemólise, meio de confirmação
Agar MYP
Agar sangue
Análise de Enterobacteriacea
Pesagem
Preparo das diluições
Inocular 1mL diluição no meio de cultivo em até 30 minutos após preparo da diluição ( 25g amostra de todas as partes da embalagem+ 225mL PEP)
Semeadura em profundidade (realizar em câmara de fluxo laminar ou com bico de Bunsen, após, incubar a 37ºC placas invertidas por 24h
Escolher 5 colônias típicas para fazer testes confirmatórios
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Agar cristal violeta vermelho neutro bile glicose (VRBG)
Seletivo e diferencial
coloração de colonias avermelhadas
Utiliza-se método de sobrecamada de Agar na placa
Contagem de bolores e leveduras
Pesagem
Preparo das diluições
Água Salina Peptonada
Tampão Fosfato
Água Peptonada 0,1% (PEP)
Tampão Fosfato
Inocular 1mL diluição no meio de cultivo em até 30 minutos após preparo da diluição ( 25g amostra de todas as partes da embalagem+ 225mL PEP)
realizar diluições 10-², 10-³ , 10-⁴ e homogeneizar
Semeadura (realizar em câmara de fluxo laminar ou com bico de Bunsen, após, incubar a 25º placas NÃO invertidas por 3 a 5 dias
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Semeadura em superfície (aeróbios)
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Semeadura em profundidade (aeróbios e anaeróbios
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contagem de Staphylococcus coagulase positiva
Pesagem
Preparo das diluições
Inocular 1mL diluição dividido em 4 placas, sendo 300µl em 3 placas e 100µl na quarta placa, nas outras diluições adicionar 100µl em cada placa ( 25g amostra de todas as partes da embalagem+ 225mL PEP)
Semeadura em superfície com auxílio de alça de Drigalski (realizar em câmara de fluxo laminar ou com bico de Bunsen, após, incubar a 35º a37ºC placas invertidas por 48h
Realizar contagem de colônias típicas
Retirar alguns halos para análises bioquímicas posteriores
Realizar testes
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Colônia preta
Formação de dois Halos
Meio de cultura contém gema de ovo e telorito
Análise de E. coli
Pesagem
Preparo de diluições 10-¹ , 10-² e 10-³
Inocular diluição no meio de cultivo caldo de LST em 3 tubos contendo tubo de Duran ( 25g amostra de todas as partes da embalagem+ 225mL PEP)
Incubar caldo nos tubos a 35ºC por 24-48h
Observar a formação de gás e turvação
A partir de cada tubo positivo inocular duas alçadas:
Simulação de Resultados
Confirmar presença de E.coli a partir de caldo EC positivo
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Caldo EC: 3, 1 e 0 tubos positivos nas diluições respectivamente- 43NMP/mL
Caldo VB: 3, 2 e 1 tubos positivos nas diluições respectivamente - 150NMP/mL
Caldo VB 35º a 37ºC por 48h
Caldo EC 44,5ºC por 48h