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TL2, Divide-se em, consiste em, tem por base, permite calcular, chamada -…
TL2
ANÁLISE DE PROTEÍNAS POR ELECTROFORESE
Reagentes
Gel SDS-Poliacrilamida e DTT
Desnatura as proteínas
BlueSafe
Torna as proteínas visíveis
Marcador de proteínas (NZYColour Protein Marker II)
Proteínas
Ovalbumina
Albumina Sérica Bovina
Catalase
Azurina
Tampão da amostra
Azul de bromofenol
Mais leve que as proteínas - Permite ver a migração destas (0.2%)
SDS
Anfipática (4%)
Tris-HCl (pH= 6.8) ( 100mM)
.
DTT
Agente redutor - desfaz as pontes di-sulfureto (200 mM)
Glicerol
Confere densidade ao tampão de amostra (20%)
Técnica de eletroforese
Migração de proteínas desnaturadas num campo elétrico
Maior peso molecular
Menor velocidade de migração
Menor peso molecular
Maior velocidade de migração
Montagem
Gel de concentração
Poros mais largos
Menor % de acrilamida
Menor resistência á corrente
Gel de resolução
Poros mais pequenos
Maior % de acrilamida
Maior resistência á corrente
"peneirar as proteínas"
DETERMINAÇÃO DA CONCENTRAÇÃO DE PROTEÍNA PELO MÉTODO DE BRADFORD
Reagentes
Soluções de Albumina Sérica Bovina, Catalase, Ovalbumina e a Azurina
Complexo com máximo de absorção de 595 nm
BlueSafe
Técnica de espectroscopia
Relação linear entre a absorvância e a concentração
Reta de calibração
y = mx + b
x = Concentração
y = Absorvância
Concentração
Massa
Divide-se em
consiste em
tem por base
permite calcular
chamada