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CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN, UNIVERSIDAD MARIANO GÁLVEZ,…
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN
HPLC
Tipo de cromatografía que combina una fase móvil líquida y una fase estacionaria finalmente dividida, esto con el fin de obtener velocidades de flujo satisfactorias.
Para alcanzar velocidades de flujos es necesario bombear las presiones para el empacamiento de las partículas, esto es común en cromatografía líquida moderna
Instrumentos modernos
Equipados con uno o más reservorios de vidrio (c/u con 500 mL de disolvente)
Gases disueltos
Es necesario removerlos ya que producen velocidades de flujos no reproducibles y ensanchamiento de banda
Instrumentos que eliminan consisten
Sistema de bombeo vacío
Sistema de destilación
Dispositivo para agitar o calentar
Sistema de burbujeo
Los gases se van a eliminar de un disolvente por medio de burbujas de un gas inerte e insluble
Elusión isocrática
Un solo disolvente de composición constante
Elusción en gradiente
La composición de un disolvente se cambia de manera continua o en una serie de pasos de manera escalonada
Sistema de bombeo
2 tipos
Bombas tipo jeringa
Bombas de tipo émbolo
Las velocidades de flujo y la determinación de la caída de presión están controladas mediante una computadora
Sistema de inyección de muestras
Se basa en un asa de muestras
Parte integral para cromatografía líquida
Constan
Asas intercambiables
Permite la elección del tamaño de la muestra
Muchos intrumentos del HPLC incorporan un inyector automático en el que introducen volúmenes variables de una manera continua
Columnas
Columnas analíticas
Control de temperatura
Empacamiento
Partículas peliculares
Partículas porosas
Precolumna
Columnas de desperdicios
Columna de protección
Detectores
El detector utilizado va a depender de la naturaleza de la muestra
Lo más utilizados para la HPLC están basados en la absorción de radiación ultravioleta o visible
Algunos instrumentos modernos están equipados con discos de filtros, que van a tener varios filtros de interferencia en lo que pueden intercambiarse rápidamente
Detectores comunes
Absorbancia
Fluorescencia
Electroquímico
Conductividad
FTIR
Espectrometría de masas
Detector más versátil que los fotómetros, más utilizados por su alta resolución
UNIVERSIDAD MARIANO GÁLVEZ
FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS Y DE LA SALUD
NUTRICIÓN CLÍNICA
QUÍMICA ANALÍTICA APLICADA A LA NUTRICIÓN
LCDA. LETICIA SALGUERO
Paula Fernanda Chávez Bonilla
Carné: 208-18-852
:check: Producen una salida libre de pulsos cuya velocidad se controla fácil
:check: Son poco prácticas cuando se cambian disolventes
:check: Constan de un pequeño volumen interno
:check: Tienen una alta presión de salida
:check: Facilidad para adaptarlas a la elución en gradiente además de sus velocidades constantes
Se construyen de tubería de acero inoxidable, algunas veces tuberías de vidrio o de polímeros. Muchas columnas empacadas de diferentes tamaños y diferentes empacamientos
:check: Mayoría con una longitud de entre 5 y 25 cm con un diámetro interno de 3 a 5 um.
:check: Columnas empacadas con partículas de a 5 um contiene muchos platos/m, el cual van a tener velocidad y un mínimo de disolvente, esto es bueno porque muchos disolventes usados en HPLC son puros y costosos
Columna entre el contenedor de la fase móvil y el inyector para acondicionar la fase móvil
Entre el inyector y la columna analítica. Previene las impureza y compuestos altamente retenidos previniendo la contaminación de la columna
Para muchos cromatógrafos es esencial una temepratura constante para obtener separaciones reproducibles
Perlas de vidrio o de polímero esféricas, no porosas con un diámetro de 30 y 40 um.
Para cromatografóa líquida consiste en micropartículas porosas que tienen diámetro de 3 a los 10 um
:check: Ambas compuestas de sílice que es común para el empacamiento por cromatografía líquida
Referencia
:!:Detector espectrofotométricos
F. James Holler, Stanley R. Crouch, (2014), "Fundamentos de Química Analítica", (novena edición), México, D.F. Learning Editores, S.A de C,V Cengage Learning, Inc. Cap.33 "Cromatografía líquida de alta resolución", Pag. 913-921
