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Métodos Analíticos de Microbiologia de Alimentos: Teste Presuntivo -…
Métodos Analíticos de Microbiologia de Alimentos: Teste Presuntivo
Técnica de NMP
Permite um resultado mais preciso no âmbito de quantidade de microrganismos numa amostra;
Método mais sensível que a técnica de plaqueamento, pois consegue quantificar concentração de microrganismos bem inferiores;
Conhecida como a técnica dos múltiplos tubos, pois para cada diluição é utilizado em média de 3 a 5 tubos;
Quantificação de microrganismos do grupo coliformes (bactérias que indicam falha de processamento, tratamento térmico ineficiente, etc);
Permite observar o grau de contaminação com matéria fecal, detecta a concentração de bactéria Gram negativa Escherichia coli (microbiota: trato gastrointestinal de animais de sangue quente - fezes);
Se há alta concentração de E. coli na amostra, indica que esta teve contato direto ou indiretamente com matéria de origem fecal;
Experimento
Numerar 9 tubos de ensaio;
Tubos de ensaio com caldo LST
Teste Presuntivo: permite verificar se há ou não a existência de microrganismos do grupo coliforme;
OBS: Caldo Lauril Sulfato Triptose (LST) - fonte de carboidrato: lactose - é um meio de cultivo para demonstração orientativa de coliformes e para enriquecimento seletivo dos mesmos, na análise de águas, alimentos e outros materiais. Devido sua elevada qualidade nutritiva e um tampão de fosfatos, garante-se o rápido crescimento e a intensa produção de gás, inclusive no caso de coliformes que fermentem lentamente a lactose;
Utilização do Tubo de Durhan invertido - permite captar a bolha de gás formada pela fermentação da lactose, indicando se há ou não o grupo coliforme na amostra;
Num segundo momento, nos tubos que indicarem positivo para coliforme fecal, fazer o teste confirmativo para o grupo coliforme total e depois um teste confirmativo específico para Escherichia coli
Utilizar a amostra de bombom de morango;
Identificar as diluições nos tubos: 1:10, 1:100, 1:1000;
Tubos com 10mL do caldo;
Pegar 1mL da amostra de diferentes diluições, separado de acordo com a diluição e realizando esse processo três vezes (3 tubos com amostra 1:10, 3 tubos com amostra 1:100 e 3 tubos com amostra 1:1000), colocar nos tubos com o caldo LST, agitar a amostra no aparelho e encubar a 35ºC de 24 a 48hrs;
Verificar se houve ou não crescimento através do aparecimento da bolha dentro do tubo de Durhan;
Após 48hrs: Teste Confirmativo.
Teste Presuntivo: Caldo LST
1mL de cada diluição em um tubo de ensaio com caldo LST (10mL) e tubo de Durhan invertido
Incubação a 35ºC por 24 a 48hrs