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PRACTICA No. 6: DETECCIÓN DE ANTICUERPOS IgG DE TOXOPLASMA POR LA TÉCNICA…
PRACTICA No. 6: DETECCIÓN DE ANTICUERPOS IgG DE TOXOPLASMA POR LA TÉCNICA DE MICRO ELISA
Coloque en la gradilla el número de micropozos cortados en forma de tira que vaya a utilizar y regrese los micropozos sobrantes a la bolsa de aluminio. Guarde en refrigeración con el desecante. Por cada lectura, incluya un control negativo, control positivo y calibrador.
Realice una dilución del suero problema (1:21) agregando en un tubo de ensaye (rotulado) 10 μL del suero de su paciente más 200 μL del diluyente (diluyente de la muestra, frasco listo para usar).
En pozos individuales coloque 100 μL de control negativo, calibrador, control
positivo y suero problema diluido. Incluya como blanco de reactivo 100 μL de diluyente en el pozo A-1; evite las burbujas de aire, mezcle con movimiento rotatorio durante un minuto.
Incube a temperatura ambiente (21-25 °C) durante 20 minutos.
Al término de la incubación, vacié el contenido de los pozos y lave en tres tiempos colocando 300 μL de solución de lavado 1x en cada pozo.
Coloque 100 μL del conjugado en cada uno de los pozos, incluyendo el blanco de
reactivo, mezcle con movimiento rotatorio durante un minuto.
Incube todos los pozos a temperatura ambiente (21-25°C) durante 20 min.
Repita los lavados como se indica en el paso 5.
Adicione 100 μL del sustrato TMB a cada uno de los pozos incluyendo el blanco de
reactivo, mezcle con movimiento rotatorio durante un minuto.
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(Nora Fernández et at 2007)
(Washington D. C., 2005)
(Elizabeth Guzman et at 2004)
(Elizabeth Guzman et at 2004)
(Nora Fernández et at 2007)
