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Comparación de la adaptación metabólica y la formación de biofilms de…

- - - - Huella metabólica: Bacterias reaisladas por FTIR (técnica de espectroscopia infrarroja para analizar, comparar y clasificar materiales biológicos), que revelo huellas de órganos en la bacteria
        
        Estas diferencias metabólicas entre cepas de se mantuvieron estables dos o tres pasajes in vitro tras el reaislamiento
        
        Huella especifica de la bacteria se modifica según localización en tracto respiratorio (cambios en polisacáridos)
        
        Huellas metabólicas únicas: De polisacáridos, ácidos grasos y proteínas al interpretarse
      - Colonización de amígdalas medida por biopelículas
        
        Depende de condiciones ambientales en las que esta la bacteria
        
        La formación de biopelículas en asilados ST 8 tienen correlación con patrón de resistencia (inhibición de antibióticos)
  - - - Para esto se utilizo FITR (genera huellas metabólicas obtenidas del tracto respiratorio superior e inferior)
- - - - Dividido en 74 triángulos (7 en lóbulos craneales y medios, 19 en caudales y 8 en accesorio)
        
        El # de triángulos con alteraciones patológicas de expreso en fracción
        
        Resultado: LLS máximo de 35 con pulmón afectado
    - - Categorías lesiones (localización- gravedad):
        
        0 = sin lesión
        
        1 = adherencias pleurales en lóbulos craneal, medial y diafragmático
        
        2 = adherencia con extensiones en lóbulos diafragmáticos
        
        3 = igual a 2 pero bilaterales
        
        4 = lesiones extendidas en lóbulos diafragmáticos
      - Lesion sospechosa de A. pleuropneumoniae
  - - - Incubadas a 37°C por 48 h
      - Agar chocolate: Incubado en atmósfera de 8% de CO2
        
        Los demás en atmósfera estándar
    - - Incubación a 37°C en condición microaerófila con 8% de CO2 en 16h
      - Colonias de esta bacteria sospechosas de ser + se subcultivaron en agar chocolate sometiéndose a pruebas bioquímicas (catalasa, ureasa, CAMP)
        
        Almacenados a -80°C
        
        Confirmados (+): Serotipados por PCR (detección de genes de toxina)
  - - - Después se añadieron 2,5 μL de ADN a la PCR, seguida de amplificación en ciclador de tiempo real
        
        Valores ct >40 se clasificaron negativos
  - - - Transferido a 96 pocillos de ZnSe
      - Después de secado a 40°C: se observaron espectros de absorción infrarroja
        
        Cada muestra se escaneó por duplicado en tres mediciones independientes
    - - En esta región de huellas metabólicas bacterianas se comprobaron diferencias de tejido por análisis de datos
      - Análisis jerárquico de conglomerados de datos y generación de dendrogramas por algoritmo Ward
  - - - Se transfirieron 200 μL de diluciones 1:10 del cultivo a diez pocillos de placa de microtitulación de 96 pocillos
        
        Lavado de pocillos: en solución salina tamponada con fosfato (x2)
        
        Secado: 40°C, incubados a 200μL de metanol x 15 min a T ambiente
        
        Tinción: cristal violeta e incubadas 20 min a T ambiente
        
        Se resuspendieron en 200 μL de ácido acético al 30
      - Paralelamente se prepararon 2 placas de micro titulación incubadas a 37°C y 5% de CO2 en 6 y 24 h
  - - - Placa incubada a 35°C-5% de CO2 por 20-24 h.
        
        Se determino MIC para cepas y sustancias
        
        La resistencia y susceptibilidad antibacteriana se evaluaron con respecto a puntos de ruptura clínicos
  - - - Resultado: Supuesto de no normalidad
- - - - Se aisló A. pleuropneumoniae en 29 de 89 muestras
        
        35 muestras positivas por PCR (se logro cultivar en 27 de estos)
        
        En 2 cerdos se cultivo, pero PCR salió negativa
      - Aislamiento de los dos tejidos en mismo huésped (exitoso en 20 cerdos)
        
        En 9 también se aisló en la nariz
        
        En estos se encontró consolidaciones rojas oscuras y lesiones confluentes, hemorrágicas en pulmones, con pleuritis fibrosa
    - - En 28 de 89 muestras y en 54 de 87, se cultivo la bacteria
      - Valor ct más alto
      - En 6 de 89 cerdos la bacteria solo se puedo aislar en esta muestra
    - - 34 de 85 cerdos positivos para A. pleuropneumoniae en amígdalas y tejido pulmonar
    - - ST 2 (n=32)
        
        ST 5 (n=3)
        
        ST 9/11 (n=5)
        
        ST 6 (n=7)
        
        ST 8 (n=2)
        
        Mismo organismo: serotipos eran iguales
  - - - Espectros FTIR: Mostraron agrupación de ST superando cambios de órganos
        
        Por esto no se pudo mostrar adaptación de un órgano utilizando diversos ST en un HCA
        
        Por eso los espectros FTIR se limitaron a 32 aislados de A. pleuropneumoniae ST2 (más frecuentes)
    - - En áreas de carbohidratos
      - El impacto del huésped en el metabolismo de A. pleuropneumoniae es específico para cada órgano
  - - - 20 aislados de amígdalas, 20 de pulmones y 9 de nariz
        
        Clasificación de amígdalas y pulmones del mismo cerdo como productor de biopelículas (concordante en 90%)
        
        35 aislados formaron biopelículas
  - - - Sin resistencia a cefalosporinas
        
        Resistencia a penicilina G
        
        Aislados sensibles a tilmicosina
        
        Pocos resistentes a ampicilina y gentamicina
    - - MICs más altos para aislados de pulmón
        
        Mayor MIC para la enrofloxacina en aislados de pulmón comparado con amígdalas
      - Mayor frecuencia de aislados en amígdalas, con MIC más alta para espectinomicina en comparación con aislados de pulmón
      - En aislados nasales hubo correlación negativa con MIC de espectinomicina
      - Menor capacidad de producción de biopelículas iba acompañado de mayor MIC
- - - - Diferencia en composición química de antígenos K y antígenos O
      - Secuencia de loci de polisacáridos
        
        ST 1-18 (revelando capsulas diferentes)
        
        Capsulas heterogéneas tipo I (ST 2, 6, 8, 9/11)
        
        Capsula tipo III (ST 5)
    - - ST 8, 8, 12 y 15: Transmitidos fácilmente en cerdos
    - - Principal causa de pleuroneumonía porcina
  - - - Principal adhesina de la matriz de este y componente de biomoléculas producidas por A. pleuropneumoniae por mecanismos subyacentes y señales ambientales
  - - - Administrada vía oral