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Comparación de la adaptación metabólica y la formación de biopelículas de…

- - - - portadores infectados de forma persistente de A. pleuropneumoniae
        
        en las amígdalas
        
        ampliamente distribuidas en la población porcina
        
        alto porcentaje de serorreactivos
        
        lesiones pulmonares crónicas
  - - - cualquier factor que debilite el sistema inmunológico de las mucosas aumenta la probabilidad de un brote de enfermedad en forma endémica en rebaños infectados
  - - - Las adaptaciones bacterianas observadas a diferentes entornos de hospedadores podrían favorecer
        
        la colonización
        
        la persistencia
        
        la infección en distintos compartimentos corporales
  - - - una infiltración neutrofílica de tejido linfoide amigdalino
  - - - aumento de la expresión de
        ARNm de IL-10 antiinflamatorio
        
        sugiere una modulación del entorno para facilitar la persistencia bacteriana
    - - investigar si el metabolismo
        La adaptación de A. pleuropneumoniae observada en condiciones experimentales refleja la situación de los cerdos infectados naturalmente en el campo
        
        Uso de espectroscopia FTIR
        
        generar huellas metabólicas a partir de aislamientos de campo de A. pleuropneumoniae obtenidos del tracto respiratorio inferior y superior de cerdos enfermos
        
        originados de piaras porcinas endémicamente infectadas
    - - las bacterias encuentran
- - - - análisis, la comparación y la clasificación de una amplia gama de materiales biológicos
        
        interpretar los espectros de vibración de grupos funcionales de componentes celulares, como polisacáridos, grasas ácidos y proteínas
        
        huellas metabólicas únicas
- - - - llevados vivos o muertos para diagnósticos de rutina
        
        examen microbiológico a la estación de campo para Epidemiología de la Universidad de Medicina Veterinaria de Hannover
        
        Examen post mortem
        
        Se extrajo toda la Tonsilla palatina de la
        canal de cerdo inmediatamente
        
        muestras de tejido amigdalino
        
        examen bacteriológico
        
        muestra para examen biológico molecular por polimerasa reacción en cadena (PCR)
        
        se extrajeron los pulmones de la
        canales
        
        se evaluó mediante el
        puntuación de lesión pulmonar (LLS)
        
        propuesta por Hannan et al. (1982) y según lo recomendado por la Farmacopea Europea para el control de la eficiencia de las vacunas
        
        lesiones pleurales
        
        Clsificación:
        
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        se subdividió esquemáticamente en 74 triángulos
        
        siete triángulos para los lóbulos craneales y medios
        
        19 triángulos para el lobulo caudal
        
        ocho triángulos para el lóbulo accesorio
        
        Interpretación
        
        3 more items...
      - dificultad respiratoria o
        muerte súbita
        
        Para realizar el diagnóstico diferencial de la pleuroneumonía porcina
  - - - Agar Columbia con sangre de oveja al 5%
        
        se incubaron a 37 ° C durante 48 horas.
        
        Luego de 24 y 48 h
        
        se subcultivaron las colonias bacterianas individuales sospechosas para su tipificación adicional por su cultivo.
        y propiedades bioquímicas.
      - Agar sangre chocolate que contenía dinucleótido de nicotinamida y adenina
        
        se incubó en una atmósfera de CO2 al 8%
      - cultivo de Pasteurellaceae y Alcaligenaceae
        
        Agar Gassner
        
        Agar sangre CNA
        
        contiene polimixina E y ácido nalidixínico para el cultivo selectivo de Streptococcus spp. y Staphylococcus spp.
    - - Se asilaro de pulmones, amigdalas y de hisopos usando el agar sangre chocolate
        
        Para mejorar el éxito del aislamiento de las amígdalas, se batió 1 g de tejido durante dos minutos, a una frecuencia de 480 rpm en 4 ml de NaCl 154 mM estéril
        
        Luego, se cultivo sin dilur realizando rayas de aislamiento y agregando las diluciones en serie 10-3 y 10-4
        
        Las placas de agar se incubaron a 37 ° C en condiciones microaerófilas con 8% de CO2 durante 16 h
        
        Las sospechosas a ser positivas para A. pleuropneumoniae según su forma, tamaño y color
        
        se subcultivaron en agar sangre chocolate
        
        se analizaron bioquímicamente para detectar
        características típicas basadas en catalasa, ureasa y los fenómenos CAMP siguiendo protocolos de diagnóstico de rutina
        
        Cultivos puros de A.
        pleuropneumoniae
        
        se almacenaron en criobancos
        
        a -80 ° C inmediatamente después del aislamiento
        
        fue confirmada y serotipada por diagnóstico por PCR basado en la detección de genes de toxinas de acuerdo con el método de Rayamajhi et al. (2005) y aglutinación con antisueros específicos
      - Todos los aislamientos de A. pleuropneumoniae procedentes de diferentes muestreos
        sitios (n = 49) de 20 cerdos
        
        sometidos a análisis FTIR
        
        probados para
        producción de biofilm
        
        probados en cribado para resistencia a antibióticos
  - - - Se examinaron 87 muestras de amígdalas y 85 muestras de pulmón mediante PCR de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Brevemente
      - se extrajeron 25 mg de tejido utilizando un kit de extracción de ADN disponible comercialmente
        
        Se agregaron
        
        2,5 μl de ADN molde a la mezcla maestra de PCR compuesta por 1,5 μl de agua
        
        5 μl de mezcla de reacción de ADN, 0,5 μl de mezcla de ensayo de Actinobacillus pleuropneumoniae
        
        0,5 μl de mezcla de ensayo CR
        
        se centrifugó a 1050 g durante 2 min
        
        amplificación en un ciclador en tiempo real
        
        1) primer ciclo a 50 ° C durante 2 min y 95 ° C durante 20 s
        
        Todos los valores de ct por encima de 40 se calificaron como negativos.
        
        2) seguido de 45 ciclos a 95 ° C durante 5 sy 60 ° C durante 1 min
  - - - Cada La muestra se escaneó por duplicado en tres mediciones independientes
        
        Un promedio de seis interferogramas con sustracción de fondo fue calculado para cada una de las 49 cepas de A. pleuropneumoniae examinadas.
        
        Los datos espectrales se analizaron utilizando The Unscrambler X (versión 10.5) y el lenguaje de programación de minería de datos Python con el paquete Scikit-learn
        
        se logró la máxima información discriminatoria en la frecuencia rango 1150−1100 cm − 1, correspondiente a la región del polisacárido
        
        las huellas dactilares metabólicas bacterianas se eligieron para probar el tejido específico
        diferencias por análisis de datos multivariados
  - - - que tenia stock congelado en 3 ml de PPLO caldo suplementado con IsovitaleX Enrichment durante 16 h agitando a 37 ° C y 5% CO2.
      - Se transfirieron 200 μL de diluciones 1:10 del cultivo a diez pocillos de una placa de microtitulación de 96 pocillos de poliestireno
        
        Se prepararon dos placas de microtitulación en paralelo con el inóculo y
        incubados a 37 ° C y 5% CO2 durante 6 hy 24 h, respectivamente.
        
        Las densidades ópticas (DO) se midieron a la longitud de onda
        630 nm.
        
        cálculo de la variación intraensayo e interensayo para la producción de biopelículas se basó en las réplicas de todas las DO630nm de todas las cepas que muestran formación de biopelículas
  - - - Se mezclaron cincuenta μl de la suspensión.
        con 10 ml de caldo estéril de Medio de prueba de Haemophilus
        
        se transfirieron 50 μL del inóculo a cada pocillo de una placa de microtitulación disponible comercialmente
        
        se incubó a 35 + 2 ° C, 5% de CO2
        durante 20-24 horas.
        
        La concentración mínima inhibitoria (MIC) fue
        determinado para cada combinación de cepa y sustancia
        
        La resistencia antibacteriana y la susceptibilidad se evaluaron con respecto a la clínica
  - - - se utilizaron las pruebas de Mardia y Royston
        
        Se evidencio una asociación monótona estadística no paramétrica entre las variables del características espectrales
    - - se registraron en
        Excel
        
        Se comparo la producción de biopelículas y resistencia antibacteriana entre A. pleuropneumoniae aislados procedentes de la
        tracto respiratorio superior e inferior
      - utilizando el Wilcoxon
        
        Se analizaron las diferencias entre aislamientos apareados del tracto respiratorio superior e inferior del mismo cerdo
      - prueba t de dos muestras.
        
        comparación de la formación de biopelículas entre los diferentes serotipos
      - Comparación usando la prueba exacta de Fisher
        
        Frecuencias de resistencia a los antibacterianos y productores de biopelículas entre los aislados, ya sea del tracto respiratorio superior o inferior
- - - - 77% de los pulmones positivos en la PCR, se pudo cultivar A. pleuropneumoniae (27 de 35)
    - - A. pleuropneumoniae se cultivó a partir de 26 de 89 muestras de amígdalas (29%)
        
        en 54 de 87 muestras de amígdalas
        
        A. pleuropneumoniae se detectó por PCR (62%) con valores de ct en el rango de
        25 y 40
        
        Mediante PCR, 34 de los 85 cerdos analizados (40%) dieron positivo para A. pleuropneumoniae
        
        tanto en las amígdalas como en el tejido pulmonar.
        
        Todos los aislamientos de A. pleuropneumoniae de diferentes sitios de muestreo en el mismo cerdo pertenecían al mismo serotipo.
        
        En los pulmones de todos
        20 cerdos
        
        consolidaciones rojo oscuro y lesiones pulmonares hemorrágicas o necrotizantes confluentes
        
        Pleuritis fibrosa o fibrinosa en la mayoría de los cerdos
        
        Lesión pulmonar
        
        rango entre 1,5
        
        consolidación en
        todo el pulmón
        
        31,7
        
        todos los lóbulos pulmonares afectados por neumonía hemorrágica fibrinosa
  - - - utilizando análisis de conglomerados jerárquicos (HCA) de datos espectrales preprocesados
        
        espectros FTIR
        
        agrupamiento específico de serotipo distinto, lo que superó los cambios específicos del órgano
        
        No se pudo mostrar la adaptación específica de órganos utilizando diferentes serotipos en un HCA
        
        la evaluación de los espectros de FTIR se restringió a los 32 aislamientos de A. pleuropneumoniae ST2, que fueron los más frecuentes entre los aislamientos
        
        Muestas de A. pleuropneumoniae ST 2, aisladas de campo que se recuperaron del pulmón, tejido amigdalino y nasal de cerdos infectados.
        
        formaron tres grupos diferentes
        
        Cada uno comprende los aislamientos de campo del mismo tejido huésped, lo que indica un impacto específico del órgano del huésped sobre el metabolismo de A. pleuropneumoniae.
        
        Aislamiento de pulmón
        
        se agruparon más cerca de los aislamientos amigdalares
        
        aislamientos nasales
        
        se agruparon más separados
  - - - veinte aislamientos
        de las amígdalas
      - veinte de los pulmones
      - nueve de la nariz
      - Clasificación de aislados de amígdalas y pulmones del mismo cerdo que los productores de biopelículas o los productores de no biopelículas fue concordante en el 90% de los cerdos
        
        Los tres aislados ST 5 y los cinco ST 9/11 no formaron biopelícula.
        
        Dos pares de aislados de ST2 obtenidos de las amígdalas y los pulmones de los mismos animales
        
        negativos para la producción de biopelículas en el ensayo
        
        Coeficiente de variación
        
        nsayo de placa de microtitulación de biopelícula fue del 26%
        
        intraensayo fue del 28%
        
        otros dos aislados de ST2 obtenidos de las amígdalas de otros cerdos
        
        15/20 aislamientos pulmonares ; 12/20 aislamientos amigdalares y 7/9 aislados nasales
        
        Pudieron formar biopelículas
  - - - no hay diferencias significativas
        
        En 15 de los 20 cerdos, los patrones de resistencia a los antimicrobianos coincidieron entre los sitios de aislamiento.
        
        Patrones de resistencia de las cepas de nariz y amígdalas de 9 ceros
        
        seis pares de aislamientos con el mismo patrón de resistencia a los antimicrobianos
        
        tres pares de aislamientos que muestran diferencias
      - grupo de los antibióticos betalactámicos, no se encontró resistencia a las cefalosporinas
        
        Pero si con mayor freccuencia la resistencia a la penicilina G
- - - - Información limitada de su interacción
  - - - ocurre ocho horas después de la infección y permanece estable durante varios pases in vitro tras el re-aislamiento
    - - alteraciones pulmonares patomorfológicas
        
        dominadas por la neumonía fibrinosa-necrotizante
        
        indica que la exacerbación de la enfermedad podría haber comenzado tan pronto como 12-18 h antes de la necropsia
  - - - causadas por la adaptación metabólica
    - - Staphylococcus aureus y Streptococcus pneumoniae
      - Se podria decir que tambien es posible que pueda diferenciar serotipos de A. pleuropneumoniae,
      - ST2
        
        Pertenecían la mayoría de los aislamientos obtenidos por pares de pulmones y
        amígdalas en el estudio de campo
        
        los anticuerpos se detectan principalmente contra cepas colonizadoras que pertenecen a otros serotipos
        
        principal causa de pleuroneumonía porcina en paises de Europa
        
        se utilizó en infecciones experimentales
        
        huellas metabólicas de los aislados de campo de A. pleuropneumoniae
        
        distintos agrupamientos en sus composiciones de polisacáridos (1200-900 cm − 1)
        
        dependiendo del tejido del huésped del que se habían aislado
      - ST
        
        Raramente aisladas
      - aislamientos nasales
        
        no se agruparon junto con los aislamientos amigdalares, sino que formaron un grupo separado
  - - - componentes solubles y celulares del sistema inmunológico del huésped
      - sustancias antimicrobianas y desinfectantes
    - - ST 1
        
        cultivada en condiciones anaeróbicas
        
        genes involucrados en LPS, así como en la biosíntesis de Poli-N-acetilglucosamina (PGA)
        
        estaban regulados positivamente como respuesta al estrés
        
        Hipotesis: global regulador génico H-NS y factor sigma de respuesta al estrés extracitoplasmático σE que gobierna la expresión de PGA
        
        media la adaptación de A. pleuropneumoniae a diferentes microambientes, como las amígdalas o pulmones
        
        PGA es el componente principal de las biopelículas
        producido por A. pleuropneumoniae
    - - en la mayoría de los aislados de ST 2 y ST 6, que no se ha descrito antes
      - 9/20 cerdos
        
        positivos para S. suis
      - A. pleuropneumoniae usa compuestos de piridina producidos por S. suis y forma biopelículas fuertes
    - - La facilitan los microorganismos colocalizados en el tracto respiratorio (Amigdalas)
    - - juegan un papel clave en la formación de biopelículas
  - - - indicativas de una alta infectividad relacionada con una alta tasa de transmisión
      - disminuyó con el tiempo después de la infección, lo que refleja la transición del estado infeccioso a la persistencia amigdalina
    - - estado más planctónico que adhesivo
    - - mayores diferencias en la huella dactilar metabólica entre nasales aislados de pulmón o amígdalas que entre los aislados de pulmón y amigdalar
    - - los patrones de resistencia a los antimicrobianos de A. pleuropneumoniae y las CIM fueron ligeramente diferentes entre aislamientos del tracto respiratorio superior e inferior
        
        CIM más alta para la espectinomicina fue más frecuente que en los aislados de pulmón
        
        Podrian reflejar las diferentes condiciones de crecimiento en las vías respiratorias superiores e inferiores.
        tracto respiratorio
        
        bacterias de la cavidad bucal están más expuestas a la sustancia que las de los órganos internos (pulmones)
        
        aislamientos con mayor MIC que residen en las amígdalas
        
        espectinomicina se administra principalmente por vía oral a los cerdos (baja biodisponibilidad)
        
        aislados de pulmón CMI para enrofloxacino, cefalotina y ceftiofur fueron mayores.
        
        alta biodisponibilidad y se administran principalmente por vía sistémica
        
        explica las CIM más altas en los aislados pulmonares
    - - , alrededor del 40-78% de los aislamientos no fueron sensibles a la penicilina G usando los puntos de corte CLSI para Pasteurella multocida de 0.25 mg / L
      - se encontró que la expresión de PGA(principal adhesina de matriz de biopelícula) estaba relacionada con una mayor resistencia a los antibióticos en comparación con el A. pleuropneumoniae planctónico
      - Se rechazó la hipótesis
        
        la biopelícula de A. pleuropneumoniae contribuya a la resistencia a los betalactámicos de las bacterias
        
        Sustentada por las condiciónes utilizadas para las pruebas de resistencia a los antibióticos.
        
        las concentraciones subinhibidoras de penicilina G inducen la producción de biopelícula en A. pleuropneumoniae