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AVALIAÇÃO DE TÉCNICAS QUANTITATIVAS E QUALITATIVAS NO DIAGNÓSTICO DE…
AVALIAÇÃO DE TÉCNICAS QUANTITATIVAS E QUALITATIVAS NO DIAGNÓSTICO DE PARASITOLOGIA.
PARA QUE SERVE O EXAME PARASITOLÓGICO DE FEZES (EPF)?
Diagnóstico de parasitos intestinais causados por helmintos e protozoários.
Critério para um diagnóstico completo e seguro: coleta adequada, preservação da amostra, evitar a contaminação por fragmentos alimentícios, pólen, células vegetais.
TÉCNICAS DE CONCENTRAÇÃO
Flutuação
Flutuação simples
Técnica de flutuação em solução saturada de cloreto de sódio: método de willis
Pesquisa de ovos com baixa densidade
Exemplo: ovos de Ancilostomídeos e de
Trichostrongulus orientalis
.
Não recomendada para cistos, ovos pesados de trematódeos, ovos de
E. vermiculares
e ovos de
A. lumbricoides
.
Homogeneização incompleta das fezes
Imperfeita separação dos ovos e dos detritos.
Pouco eficaz
Feita com fezes frescas e uma solução saturada de Cloreto de sódio, de densidade 1,20g/ml.
Procedimento
Usar luvas durante todo o procedimento.
Colocar de 1 a 2 g de fezes frescas, em uma cuba de 3 cm de diâmetro com capacidade aproximada de 20 ml. Completar com ¼ da capacidade do recipiente com a solução saturada de cloreto de sódio.
Suspender as fezes na solução saturada salina até homogeneizar completamente.
Completar o volume. Colocar uma lamínula (22 x 22 mm) ou uma lâmina sobre a borda da cuba.
A lamínula deve ficar em contato com o menisco durante 30 a 45 minutos: não deverá haver formação de bolhas de ar entre a lamínula e a superfície do liquido. A gota que contém os ovos se adere a face inferior da lamínula.
Remover a lamínula e inverter rapidamente a posição sobre uma lâmina. Examinar ao microscópio com objetiva de pequeno aumento.
Centrifugo-flutuação
Técnica de Faust, feita através da centrífugo-flutuação
Detecção de cistos (pesados) de protozoários e ovos de helmintos como
Schistosoma mansoni
.
Menos eficaz que o método de Ritchie.
Sedimentação
Sedimentação simples
Técnica de sedimentação espontânea: método de Hofman, Pons e Janer - HPJ (1934)
Técnica-padrão mais utilizada em laboratórios
Fácil manuseio
Baixo custo
Boa sensibilidade
Detecta cistos, larvas e ovos
Centrifugo-sedimentação.
Técnica de centrifugo-sedimentação: método de Ritchie
Melhor que a técnica de Faust.
Eficaz na detecção de cistos de protozoários e ovos de helmintos como
Schistosoma mansoni.
Usado juntamente juntamente com a coloração pela técnica de Kinyoun para análise quantitativa e qualitativa de helmintos e protozoários.
Desvantagem
Presença de detritos fecais no sedimento analisado dificulatando a identificação dos parasitas.
Procedimento
Conservação das fezes em uma solução Mertiolado-Iodo-Formaldeído.
Filtração e permanência em repouso 20minutos.
Adição de éter.
4.Agitação e centrifugação.
Desprezar o sobrenadante e utilizar o sedimento para ser analisado em uma lâmina com lugol.
CONDIÇÕES PARA UM DIAGNÓSTICO SATISFATÓRIO
Escolha do método de análise
O grau de confiança deve ser conhecida
A escolha deve ser feita por pessoal do laboratório que tem conhecimento da exatidão e precisão do método.
Exames macroscópicos
Consistência
Cor
Odor
Presença de muco
Presença de parasitos adultos
Exames microscópicos
Qualitativo e/ou Quantitativo
Melhores resultados obtidos pelo uso de técnicas de concentração
Mecânicos
Centrifugação
Biológicos
Coleta de fezes
Coletadas em recipiente limpo e seco
20 a 30g de fezes para as análises
As fezes devem ser colocadas em refrigeração, se a análise não for realizada no dia. Não devem ser congeladas e nem incubadas, a não ser que seja para fins de estudos na biologia molecular.
Bário e Bismuto podem interferir na análise
Tempo de análise: 30 minutos para fezes líquidas, 1hora para as pastosas e 24 horas para amostras sólidas.
Preservação: uso de soluções como formaldeído.
Resistência da população em coletar material para esse tipo de exame.
TÉCNICAS ESPECIAIS
Método de KATO-KATZ
Detecção ovos de
Schistosoma mansoni
,
Trichuris trichiura
e
Ascaris lumbricoides
.
Fácil manuseio
Baixo custo
Técnica qualitativa e quantitativa
Dificulta identificação de alguns cistos de protozoários.
Difícil de ser realizado em fezes diarréicas.
Procedimento
Preparar uma solução de diafanizadora (verde de malakita).
Cortar um papel celofane em tamanho de lamínula e mergulhar na solução diafanizadora por 24 horas.
Colocar uma amostra de fezes sobre o papel absorvente.
Comprimir as fezes em uma tela para passagem de ovos de helmintos e detritos menores que os ovos.
Transferir as fezes peneiradas para uma placa perfurada.
Após encher, retirar a placa sobre a lâmina.
Com o auxílio de uma pinça, pegar o papel celofane e cobrir o bolo de fezes, inverter a lâmina em papel e pressionar.
Aguardar duas horas e examinar ao microscópio todos os ovos presentes na preparação.
Técnica de Mini-FLOTAC
Recomendada para laboratórios de baixos recursos.
Não requer uso de centrífuga ou outros equipamentos.
Alta precisão na contagem de ovos.