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微生物學第十組微生物生長的測量(Measurement of Microbial Growth) - Coggle Diagram

- - - - 凱氏定氮法Kjeldahl method
        
        有機化合物中氮含量的檢測方法
        
        由凱耶達爾於1883年發明的。
        
        方法
        
        將有機化合物與硫酸共熱使其中的氮轉化為硫酸銨。
        
        加入硫酸鉀來提高中間產物的沸點（從337℃到373℃）。
        
        在得到的溶液中加入少量氫氧化鈉，然後蒸餾。
        
        這一步會將銨鹽轉化成氨。而總氨量（由樣本的含氮量直接決定）會由反滴定法確定
        
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        缺點
        
        總凱氮量有時並不能真正地反映樣本中的蛋白質含量，因為所測定的部分含氮量可能不是由蛋白質轉化來的。
      - 微生物新陳代謝過程中離不開碳元素。
        
        測定培養物含碳量的方法
        
        將培養物混入1ml水或無機緩衝液中，用2 mL2%重鉻酸鉀溶液在100 ℃下加熱30 min,冷卻
        
        加水稀釋至5 mL,在580 nm波長下測定光密度值(用試劑作空白對照，並用標準樣品作標準曲線),即可推算出生長量。
      - 其他可用來檢測的物質
        
        磷、DNA、RNA、ATP和N-乙醯胞壁酸
        
        產酸、產氣、產二氧化碳(用標記葡萄糖作基質)、耗氧、黏度和產熱等
  - - - 測培養液放在刻度離心管中作自然沉降或進行一定時間的離心，然後觀察沉降物的體積。
        
        缺點
        
        無法區別死菌和活菌
        
        培養基含量減少
        
        侵入式操作導致的雜菌干擾
        
        獲取的採樣點少
        
        測量不精確
        
        優點
        
        可適用於一切微生物測量
        
        採用離心法或過濾法測定
        
        過濾法
        
        絲狀真菌可用濾紙過濾，如為細菌可用乙酸纖維膜等濾膜進行過濾。過濾後，細胞可用少量水洗滌，再真空乾燥(-40℃以下),稱乾重。
        
        離心法
        
        將待測培養液離心，再用清水洗滌離心1~5次後乾燥，可用105℃、100℃或紅外線烘乾，也可在較低的溫度(-80℃或-40℃)下進行真空乾燥，然後稱乾重。
- - - - 當抗原與抗體在特殊稀釋系統中反應而且比例合適(一般規定抗體過量)時，形成的可溶性免疫複合物在稀釋系統中的促聚劑（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反應液出現濁度。
        
        當抗體濃度固定時，形成的免疫複合物的量隨著檢樣中抗原量的增加而增加，反應液的濁度也隨之增加。通過測定反應液的濁度與一系列標準品對照，即可計算出檢樣中抗原的含量。
    - - 1、抗原或抗體量大大過剩，可出現可溶性複合物，造成誤差。
      - 2、應維持反應管中抗體蛋白始終過剩。
      - 3、易受到脂血的影響。
    - - 1.免疫透射比濁法抗原抗體結合後，形成免疫複合物，在一定時間內復合物聚合出現濁度。
      - 2.免疫散射比濁法一定波長的光沿水平軸照射，通過溶液使遇到抗原抗體複合物粒子，光線被粒子顆粒折射，發生偏轉，光線偏轉的角度與發射光的波長和抗原抗體複合物顆粒大小和多少密切相關。
      - 3.免疫膠乳比濁法膠乳比濁法即是將待測物質相對應的抗體包被在直徑為15－60nm的膠乳顆粒上，使抗原抗體結合物的體積增大，光通過之後，透射光和散射光的強度變化更為顯著，從而提高試驗的敏感性。
- - - - (1)烘箱設定溫度通常為 1050 °C 或 1000 °C
      - (2)採用紅外線烘乾
      - (3)800℃或400℃下真空乾燥
  - - - 活性乾酵母（activity dry yeast, ADY）
- - - - 放在有刻度的離心管中
        
        離心後
        
        倒出上清夜
        
        測出上清夜體積為v
        
        則菌絲濃度為（10-v）/10
  - - - 由於離心沉澱物中夾雜有一些固體營養物
        
        結果會有一定偏差
- - - - 所需用具
        
        塑膠培養皿(直徑50mm)6個、無菌濾膜6張、安全吸球、量筒、燒杯數個、錐形瓶、鑷子，取藥杓、秤藥紙，吸收墊，定量玻璃吸管，隔熱板。
      - 所需儀器
        
        過濾抽氣裝置，恆溫培養箱、微量天平、電磁加熱攪拌器。
    - - 等培養基稍微冷卻之後，把它平均的倒入６個4~5mL的空小培養皿，下來等待凝固後就可以做下一個實驗了。
      - 再來做十倍稀釋，要先把取回來的水樣樣本取11mL，加入有100mL的二段水的小燒杯，混合均勻後，再取11mL，加入另一個100mL二段水的小燒杯，做10^-2 稀釋，往下繼續做，做到10^-5稀釋，所以會有6個濃度各別100mL，分別是原液、10、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5倍。
      - 然後調備完的東西放入量瓶將磁石放於電磁加熱攪拌器加熱，並用隔熱板圍住，沸騰時需馬上關掉磁石攪拌器。
      - 稀釋完之後，把小燒杯跟製作好的培養皿和所需要的工具做過濾的動作，一開始先把0.45μm的濾膜放在真空抽氣幫浦上面，然後用二段水潤洗過一遍，之後要從低濃度稀釋的容易先到，所以先把10^-5濃度的水樣倒入過濾，之後再用二段水將周圍處潤洗過一次確保都有全部下去，過濾完之後，要使用鑷子小心將濾膜平鋪放入凝固的培養基中，並且用標籤加以標示清楚。
      - 二段水以1000mL加入51g　M-endo agar.和95%酒精20mL 現在只要需30mL的二段水所以用下面公式算出所需要的量
        M-endo agar 51/1000 = X/30，X=1.53g
        95%酒精 20/1000=Y/30，Y=0.6mL
      - 最後把做好的培養皿倒放置放入35±１℃的培養箱內培養一天，隔天再去看結果如何。
      - 使用的培養基為M-endo agar.
    - - 利用0.45±0.02u,直徑為47mm的無菌濾紙在抽氣幫浦真空抽氣上運作,在將它放在培養液的飽和吸收墊上培養22至24小時,由於大腸菌類無法濾過因而置留在濾膜上,所以可看出菌落。