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TD 2 Technique de séparation des aa et protéines - Coggle Diagram
TD 2 Technique de séparation
des aa et protéines
Technique de séparation des aa
2 critères de séparation
Polarité
Caractère hydrophile
Caractère hydrophobe
3 techniques
Chromatographie a couche mince
Petites molécules
Migration par capillarité
Composé hydrophile
Retenu par phase fixe
Migration lente
Composé hydrophobe
Entrainé par phase mobile
Migration rapide
Calcul de rapport frontal (Rf)
Distance migration aa / distance migration font du solvant
Electrophorèse
Si composé chargé - ou + --> Migration vers le pôle du signe opposé
pH < pHi --> cation (+)
Migration vers cathode (-)
pH > pHi --> anion (-)
Migration vers anode (+)
Si pas de charge --> pas de migration
pH = pHi --> charge globale nulle
Chromatographie d'échange d'ion
Echangeur d'ion = support portant les groupements
Echangeur de cation
Porte grpmt (-)
Retient / échanges cations
Echangeur d'anion
Porte grpmt (+)
Retient / échange des anions
Technique de séparation des protéines
Séparation par chromatographie d'échange d'ion
Echangeur d'anion
DEAE-cellulose
Charge (+) agit avec protéine -
Echangeur de cation
CM-Cellulose
Charge (-) agit avec protéine +
Electrophorèse
Supports utilisés
Acélate de cellulose
Gel de polyacrylamide
Migration
Protéine + vers pole -
Protéine - vers pole +
Notion de pHi des protéines
Protéines (+) --> pH travail < pHi
Protéine (-) --> pH > pHi
Charge totale nulle --> pH travail = pHi