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PRÁCTICA 3: DETERMINACIÓN DE COMPLEMENTO HEMOLÍTICO HUMANO POR…
PRÁCTICA 3: DETERMINACIÓN DE COMPLEMENTO HEMOLÍTICO HUMANO POR INMUNODIFUSIÓN RADIAL (IDR)
Extraer 3 mL de sangre mediante venopunción a 4 pacientes diferentes y colocarlos en diferentes tubos de ensayo de 13 x 100 rotulándolos respectivamente.
Centrifugar cada tubo con sangre a 2500 rpm por 5 minutos, para separar el suero.
Realizar una mezcla de sueros, colocando 200 μL de suero de cada paciente
en un tubo 13 x 100 mm, y rotularlo como “pool 100%”.
Colocar 10 μL de suero de paciente en una horadación de la placa IDR, primero se
colocan 5 μL esperar 5 minutos, y añadir los otro 5 μL.
Colocar en la horadación rotulada como 1 la dilución 100%, en la horadación
rotulada como 2 dilución, la dilución 50%, y en la horadación 3 la dilución 25%.
Incubar una hora a temperatura ambiente.
Incubar 24 horas en refrigerador.
(Washington D. C., 2005)
Incubar 1-3 horas a 37 °C.
Leer el halo de hemolisis, y realizar una curva en papel milimétrico en el eje de las
“x” los milímetros de diámetro (mm) y en el eje de la “y” los porcentajes de hemolisis de 0 a 100 % e interpolar el resultado de su paciente.
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(Washington D. C., 2005)
(Eugenia Mata y Bruno Lomonte, et al 2015)
(Eugenia Mata y Bruno Lomonte et al 2018)
Tomar un segundo tubo 13 x 100 mm y añadir 200 μL de solución salina fisiológica al 0.9 % W/V más 200
μL del pool, y rotularlo como 50%.
Tomar otro tubo 13x100 mm y añadir 200 μL de solución salina fisiológica al 0.9% W/V más 200 μL de la dilución 50 % y rotularlo.
(Cristina Villena et al 2016)
(Esther Fernández et al 2013)
(Esther Fernández et at 2013)
