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PRÁCTICA 2: FAGOCITOSIS - Coggle Diagram
PRÁCTICA 2: FAGOCITOSIS
Extraiga de 3 a 5 mL de sangre (venopunción) y transferirla a un tubo con tapón de baquelita y 3 perlas de cristal
Inmediatamente desfibrine la sangre dentro del tubo mediante un movimiento
de vaivén de forma constante pero no fuerte, durante 8 minutos.
Agregue sangre desfibrinada a un cubreobjetos cubriéndolo por completo
el cual previamente se adhirió a un tapón de plástico 000 con bálsamo de Canadá.
Coloque el cubreobjetos en una cámara húmeda y lleve a incubar a 35 °C durante 30 minutos.
Mientras incuba, transfiera el resto de la sangre desfibrinada a un tubo de 13 x
100 mm y lleve a centrifugar a 2000 rpm durante 15 minutos.
Recolecte el suero a un tubo de 13 x
100 mm y agregue 200 μL de un cultivo reciente de C. albicans (en cual estará diluído). Mezcle cuidadosamente sin inversión del tubo e incube a 37 °C durante
15 minutos. En este paso se produce la opsonización del microorganismo.
Pasados los 45 min. de incubación del cubreobjetos con sangre desfibrinada,
se lava con buffer de Giemsa, y se dejan con buffer, mientras se le agrega el suero opsonizado para evitar que se seque la sangre. Incubar durante 15
minutos a 37 °C en cámara húmeda.
Lavar el cubreobjetos incubado con solución salina para retirar el suero y
proceder a la tinción. Dejar secar la muestra
Separar el cubreobjetos del tapón con Acetona diluida y haga su montaje usando una gota de bálsamo de Canadá sobre un portaobjeto.
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(Luis Esaú et al 2014)
(Helios Group)
(Cristina Villena et al 2016)
(Esther Fernández et al 2013)
(Washington D. C., 2005)
(Terry Leonard et al 2017)
(Cristina Villena et al 2016)
(ANORSA)
