Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
เทคนิคการแยกบริสุทธิ์และการตรวจสอบสารชีวโมเลกุล - Coggle Diagram
เทคนิคการแยกบริสุทธิ์และการตรวจสอบสารชีวโมเลกุล
การตรวจสอบสารชีวโมเลกุล
การหาโครงสร้างปฐมภูมิของโปรตีน
1.เป็นการทำลายพันธะเพปไทด์ด้วยกรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น 6 M
เป็นการระบุชนิดของกรดอะมิโนที่บริเวณปลายเอ็นและปลายซีในโปรตีน
3และ4 โปรตีนจะถูกตัดออกเป็นท่อนๆและนำไปหาลำดับกรดอะมิโนโดยเครื่องอัตโนมัติเริ่มต้นจากปลาย เอ็นตามด้วยการตัดกรดอะมิโนแต่ละตัวในสายพอลิเพปไทด์ตามลำดับ
เทคนิคการแยกบริสุทธิ์
การแยกส่วนประกอบของเซลล์โดยอาศัยสมบัติพื้นฐาน เช่น ขนาด น้ำหนัก ความหนาแน่น แรงลอยตัวประจุ ความชอบน้ำ ความไม่ชอบน้ำ ความจำเพาะในการจับปฏิสัมพันธ์กับสารอื่น
การทำให้โปรตีนบริสุทธิ์ขึ้นจำเป็นต้องรักษาสภาพที่อยู่ในอุณหภูมิสูงถึง 4 องศาเซลเซียสเพื่อป้องกันโปรตีนถูกทำลายหรือสูญเสียโครงสร้างในสามมิติ
1.1การสกัดโปรตีนให้บริสุทธิ์จากเซลล์
เริ่มจากการนำโปรตีนออกจากเซลล์และองค์ประกอบของเซลล์เรียกว่าการทำให้เป็นเนื้อเดียวกันซึ่งทำให้เซลล์แตกสามารถทำได้หลายวิธีดังนี้
1.การทำให้เป็นเนื้อเดียวกันด้วยการบด
2.การทำให้เป็นเนื้อเดียวกันด้วยการสับเป็นชิ้น
3.การทำให้เป็นเนื้อเดียวกันด้วยการใช้คลื่นเสียง
4.การทำให้เป็นเนื้อเดียวกันด้วยการแช่แข็งเซลล์และละลาย
1.2การปั่นตกตะกอน
เซลล์ที่แตกเป็นเนื้อเดียวกันแล้วจะนำไปทำการหมุนเวียนที่ความเร็วแตกต่างกันโดยการหมุนเหวี่ยง
1.3การตกตะกอนด้วยเกลือ
อาศัยความสามารถในการละลายโดยเกลือแอมโมเนียมซัลเฟตนิยมใช้ในขั้นตอนนี้เรียกว่า การตกตะกอนด้วยเกลือ
ซึ่งโปรตีนจะละลายน้ำได้เพิ่มขึ้นเมื่อเติมเกลือลงไปแต่เมื่อเติมเกลือลงไปเพิ่มขึ้นน้ำที่ล้อมรอบโรตีจะน้อยลงโปรตีนจะจัดกันเองโดยพันธะไฮโดรโฟบิกและตกตะกอน
โปรตีนที่สนใจจะตกตะกอนในช่วงการอิ่มตัวของเกลือต่างกัน
1.4โครมาโทกราฟีแบบคอลัมน์
เป็นการแยกสารประกอบที่แตกต่างกันโดยอาศัยความสามารถในการกระจายตัวแตกต่างกันระหว่างเฟส
โดยเฟสที่บรรจุอยู่ในคอลัมน์เรียกว่า เฟสคงที่
สารละลายที่ใช้เรียกว่า เฟสเคลื่อนที่
เฟสเคลื่อนที่จะไหลผ่านเฟสคงที่และพาตัวอย่างแยกไปพร้อมกัน
1.5การแยกโปรตีนโดยวิธีเจลอิเล็กโทรโฟริซิส
เป็นเทคนิคหนึ่งที่ใช้หาขนาดของสารชีวโมเลกุลได้หลายชนิดโดยอาศัยสมบัติที่แตกต่างกันในการเคลื่อนที่จากขั้วไฟฟ้าหนึ่งไปยังขั้วไฟฟ้าภายใต้สนามไฟฟ้า
1.อิเล็กโทรโฟริซิสแบบเจลพออะคริลาไมด์
2.อิเล็กโทรโฟริซิสแบบไอโซอิเล็กทริก โฟกัสซิิง
.อิเล็กโทรโฟริซิสเจลแบบสองมิติ
เทคนิคการวิเคราะห์โปรตีน
แมสสเปกโทรเมทรี
เป็นเทคนิคการวิเคราะห์ขนาดของโมเลกุลได้อย่างแม่นยำ โดยสารที่ต้องการศึกษาจะถูกทำให้เป็นประจุด้วยการใช้รังสีหรืออนุภาคขนาดเล็กที่เคลื่อนที่ด้วยความเร็วสูงจะทำให้โมเลกุลของสารที่ต้องการศึกษานั้นแยกเป็นชิ้น
เทคนิคเวสเทิร์นบล็อท
เป็นการตรวจหาโปรตีนซึ่งตั้งชื่อให้คล้องจองกับเซาเทิร์นบล็อทและนอร์เทิร์นบล็อท
การประยุกต์ใช้เทคนิคทางชีวโมเลกุล
การประยุกต์ใช้ในการวิฉัยโรค
โรคทางพันธุกรรมเป็นความผิดปกติในมนุษย์ที่เกิดจากการกลายพันธุ์ของยีนเช่นโรคโลหิตจางธาลัสซีเมียเป็นเลือดที่มีลักษณะเม็ดเลือดแดงผิดปกติและแตกง่าย เมื่อนำข้อมูลที่ได้มาประยุกต์ใช้สร้างตัวตรวจจับหายีนผิดปกติด้วยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสทำให้สามารถพัฒนาวิธีคัดกรองหาผู้ป่วยที่มียีนผิดปกติได้
ยีนบำบัด
เป็นโรคเกี่ยวกับความผิดปกติทางพันธุกรรมโดยการนำยีนใหม่ใส่ในเซลล์ของผู้ป่วยเพื่อรักษาความผิดปกติเรียกว่ายีนบำบัด
โดยนำยีนหมายคนเข้าในพาหะเพื่อนำเข้าสู่เซลล์ซึ่งพาหะที่เหมาะสมได้แก่ ไวรัส
โครงการจีโนมมนุษย์
เป็นอภิมหาโครงการทางเทคโนโลยีชีวภาพ ที่ได้ศึกษาจัดทำแผนที่ของจีโนมของมนุษย์ ซึ่งมีความละเอียดระดับนิวคลีโอไทด์ หรือ คู่เบส เพื่อที่จะวิเคราะตำแหน่งของหน่วยพันธุกรรม หรือ ยีนของมนุษย์