Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
เทคนิคการแยกบริสุทธิ์และการตรวจสอบสารชีวโมเลกุล - Coggle Diagram
เทคนิคการแยกบริสุทธิ์และการตรวจสอบสารชีวโมเลกุล
:pencil2:เทคนิคการแยกบริสุทธิ์
1.การสกัดโปรตีนจากเซลล์
บด
สับ
คลื่นเสียง
แช่แข็งแล้วละลาย
2.การปั่นตกตะกอน
หมุนเหวี่ยง 600 g --> เซลล์ไม่แตก ได้นิวเคลียส
15000 x g ไมโทคอนเดรียตกตะกอน
100000 x g โครโมโซมตกตะกอน
3.การตกตะกอนด้วยเกลือ
เติมเกลือแล้วน้ำจะล้อมรอบโปรตีนน้อยลง โปรตีนจะจับกันเองและตกตะกอน
หมุนเหวี่ยงและทิ้งตะกอนไป
ใส่เกลือเพิ่มกลุ่มโปรตีนอื่นจะตกตะกอนลงมา (ตามช่วงการอิ่มตัวของเกลือ)
4.โครมาโทกราฟีแบบคอลัมน์
อาศัยการกระจายตัวที่แตกต่างกันในเฟสคงที่
5.ประเภทของโครมาโทกราฟีแบบคอลัมน์
แบบกรองผ่านเจล - แยกตามขนาดโมเลกุล (ใหญ่ออกก่อน)
แบบสัมพรรคภาพ - จับอย่างจำเพาะกับโปรตีนที่สนใจ (ไม่ถูกจับจะออกมาก่อน)
แบบไอออนเอกซ์เชนจ์ - เป็นการแลกเปลี่ยนประจุ
6.การแยกโดยเจลอิเล็กโทรโฟริซิส
แบบไอโซอิเล็กทริกโฟกัสซิง - แยกตามค่าไอโซอิเล็กทริก
แบบสองมิติ - แยกในสองทิศทางที่ตั้งฉากกัน
แบบเจลพอลิอะคริลาไมด์ - แยกตามขนาด
:pencil2:การตรวจสอบสารชีวโมเลกุล
การหาโครงสร้างปฐมภูมิของโปรตีน
ระบุชนิดกรดอะมิโนบริเวณปลายเอ็นและปลายซี
โปรตีนจะถูกตัดเป็นท่อน ๆ และหาลำดับกรดอะมิโน
ทำลายพันธะเปปไทด์ด้วย HCl แล้ววิเคราะห์ด้วย HPLC
จะเริ่มตัดจากปลายเอ็นตามด้วยการตัดกรดอะมิโนแต่ละตัว
การสลายแบบเอ็มแมน
ย่อยกรดอะมิโนให้สั้นลง
หาลำดับของกรดอะมิโนด้วย PITC
:pencil2:เทคนิคการวิเคราะห์โปรตีน
แมสสเปคโทรเมทรี
แยกตามขนาดโมเลกุลได้แม่นยำ
ต้องถูกทำให้เป็นประจุก่อน
เกิดเป็นประจุบวกและเร่งไอออนด้วยสนามไฟฟ้าในสภาวะสุญญากาศไปกระทบกับตัวรับสัญญาณแล้วคำนวณออกมาเป็นค่า m/e
เวสเทิร์นบล็อท
วิเคราะห์โปรตีนโดยการแยกด้วย SDS-PAGE
ย้ายโปรตีนไปเมมเบรนที่เหมาะสม
ใช้ตัวตรวจจับที่จำเพาะกับโปรตีนที่สนใจ จับสัญญาณนั้น
:pencil2:การประยุกต์ใช้เทคนิคทางชีวโมเลกุล
ยีนบำบัด - นำยีนใหม่ใส่ในเซลล์ผู้ป่วยเพื่อรักษาความผิดปกติ
โครงการจีโนมมนุษย์ - ศึกษาหาลำดับเบสทั้งหมด 3 พันล้านเบส เพื่อป้องกันและรักษาความผิดปกติของโรคที่เกิดจากพันธุกรรมได้
วินิจฉัยโรค
ประยุกต์ใช้สร้างตัวตรวจจับหายีนผิดปกติด้วยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส
เป็นประโยชน์ในการเลือกวิธีรักษาที่เหมาะสม