Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
เทคโนโลยีดีเอ็นเอและพันธุวิศวกรรม - Coggle Diagram
เทคโนโลยีดีเอ็นเอและพันธุวิศวกรรม
เทคโนโลยีดีเอ็นเอ
DNA sequencing
เทคนิคการตรวจหาลำดับนิวคลีโอไทด์
หลักการแยกขนาดดีเอ็นเอ โดย gel electrophoresis
Genetic marker
ใช้บอกความเหมือนต่างทางพันธุกรรมของสิ่งมีชีวิต โดย DNA fingerprint
DNA fingerprint
Polymerase chain reaction
สิ่งที่ต้องใช้
Nucleotide (dATP, dGTP, dTTP, dCTP )
DNA polymerase(เติม nucleotide)
enzyme bact : Taq polymerase(ทนความร้อน)
DNA primer
เครื่อง Thermocycler
DNA ต้นแบบ
ขั้นตอน
annealing - ลดอุณหภูมิประมาณ 55 องศาเซลเซียส 20วินาที primase นำ primer มาจับ
extension - ขึ้นอุณหภูมิประมาณ 72 องศาเซลเซียส ให้ Taq polymeraseนำนิวคลีโอไทด์ มาจำลองสายดีเอ็นเอจาก 5' --> 3'
Denaturation - สูญเสียสภาพ ทำให้ดีเอ็นเอแยกออกจากกัน ด้วยอุณหภูมิประมาณ 95 องศาเซลเซียส
พันธุวิศวกรรม
Recombiant DNA(ดีเอ็นเอสายผสม)
ชิ้นส่วนดีเอ็นเอ หรือ ยีนที่สนใจ
อาศัยเอนไซม์มาตัดหรือต่อพอลินิวคลีโอไทด์
ตัดจำเพาะ : nuclease
ต่อ : ligase
DNA vector(พาหะ) - plasmid
นำชิ้นส่วนดีเอ็นเอ หรือ ยีนที่สนใจ ที่ตัดออกมาไปเชื่อมกับดีเอ็นเอพาหะ
การนำดีเอ็นเอสายผสมเข้า
สู่เซลล์เจ้าบ้าน
คัดเลือกเซลล์ของโฮสท์ ที่ได้รับดีเอ็นเอสายผสม
gene transfer
Transformation - เกิดการนำพาสารพันธุกรรมส่งต่อให้อีกเซลล์ มีdonor รับ ส่งให้recipient cell
Conjugation - ส่งต่อพลาสมิดที่ท่อพิลลิ
Transduction - ไวรัสนำพาสารพันธุกรรมไปส่งต่อ เนื่องจากไปทำลายdonor แล้ว
เอนไซม์ตัดจำเพาะ
จะไปตัดพันธะฟอสโฟไดเอสเตอร์ที่ตำแหน่งเบสจำเพาะ หรือที่ palindromic sequence(กลุ่มเบสมีประมาณ 4-8 คู่ที่สอดคล้องกับเอนไซม์จำเพาะนั้นๆ)
Sticky ends (ตัดไม่ตรงกัน - ปลายเหนียว)
Blunt ends (ตัดตรงกัน - ปลายทู่)
DNA cloning
ใช้พลาสมิด
ใช้วิธีการ PCR
เทคนิค PCR
การโคลน DNA ในหลอดทดลองเพื่อเพิ่มจ านวนโมเลกุลของDNA ในปริมาณมาก โดยใช้เครื่องเพิ่มปริมาณ DNA อัตโนมัติ (thermocycler หรือ PCRmachine)
Thermocycler หรือ PCR machine
เป็นเครื่องมือที่ท าหน้าที่ควบคุม
อุณหภูมิให้ปรับเปลี่ยนได้ตามที่ก าหนด สามารถก าหนดจ านวนรอบและเวลาได้อัตโนมัติ
คือ การเพิ่มปริมาณหรือคัดลอกดีเอ็นเอ/ยีน
