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Mapa Mental da Biologia Molecular - Conhecimentos, Eletroforese…
Mapa Mental da Biologia Molecular - Conhecimentos
PCR
DNA template
DNA molde
dNTP
dinucletídeo trifosfato
taq DNA polimerase
amplificação
Termociclador
Desnaturação da fita
Anelamento
Extensão
Primer
Iniciadores
dímero de primer
Solução tampão
Íons MgCl2
Cofator da DNA polimerase
Sequenciamento :
Maxam-Gilbert
separação de fitas por eletroforese
separação do DNA em nucleotídeos
Marcação e dissoclação de fitas
eletroforese de fragmentos
Sanger
método enzimatico
método de terminação de cadeia
quando adiciona algum nucleotídeo (n lembro o nome) e depois não tem como adicionar outro na cadeia
Manual
automatizado
capilar
Eletroforese
Técnica de separação de moléculas
Pelo tamanho
Sofre influência de um campo elétrico
Utiliza uma cuba com eletrodos
Tampão da amostra
Para visualizar e monitorar a corrida eletroforética
Utiliza-se um controle
Corantes para detecção
Brometo de etídeo
Nitrato de prata
Comassie Blue
Autorradiografia
Variantes
Eletroforese em campo pulsado
eletroforese capilar
gel para RNA
native-page
SDS-page
Aplicações
análise de efeitos de hormônios e drogas
Desenho de primer
FWD
aquele que se liga na região 3OH' - primer 1
REV
segundo primer
O ideal são nucleotideos de 18 a 30
Temperatura de melting
não pode ser muito diferente entre si
Temperatura de anelamento
Regra de alguém que não lembro o nome
Tm = 4(G+C) + 2 (A+T)
Tecnologia do DNA recombinante
Enzimas de restrição
Endonucleases
Quebram ligações de fosfodiéster no interior da molécula
EcoRI
Reconhece a sequência G-AATTC
HindIII
Reconhece a sequência A-AGCTT
Enzima Hae III
Reconhece a sequência GG-CC
Exonucleases
Removem um nucleotídeo de cada vez, começando na extremidade
Conjunto de técnicas que permite combinar um DNA de um organismo com um DNA de uma fonte diferente
Etapas de clonagem gênica
A DNA ligase liga os fragmentos de DNA no plasmídeo
Transformação: Processo em que introduz o plasmídeo na bactéria
As enzimas de restrição cortam uma parte do DNA que será clonado (inserto)
Seleção das bactérias que receberam o plasmídeo; seleção feita através de um marcador adicionado ao plasmídeo
Aplicação:
Hormônio do crescimento
Produção do hormônio hGH
É adicionado em um plasmídeo o gene que codifica a produção de hGH
O plasmídeo é inserido em uma bactéria, e essa bactéria passará a produzir o hormônio HG, através de um indutor químico no meio de cultura
Depois, as bactérias são quebradas para extração do hormônio.
É feito um tratamento nesse hormônio para atingir o grau de pureza exifgido para o uso terapêutico
Tecnica utilizada para identificação de fragmentos de DNA
Southern Blotting
Northern Blotting
Western Blotting
Técnica usada para separação de moléculas proteicas
Fragmentos de diferentes tamanhos são separados por eletroforese
Tecnica utilizada para identificação de fragmentos de RNA
Não há necessidade de utilizar enzimas de restrição, pois as moléculas de RNA são naturalmente menores
Fragmentos de diferentes tamanhos são separados por eletroforese
O resultado da eletroforese é transferido para uma membrana de nitrocelulose.
Essa membrana é submetida a um processo de identificação das moléculas impregnadas nele. Pode ser por identificação química ou física (radiação).
Fragmentação da molécula de DNA por meio de digestão por enzimas de restrição
Fragmentos de diferentes tamanhos são separados por eletroforese
AMBIENTE X GENÉTICA
Nutrigenomica
Estuda a influencia das moléculas e nutrientes ingeridos pela alimentação sobre a expressão genica
Essa interação ocorre atraves da modulação da ativação ou silenciamento dos genes (epigenético). Não ocorre mudanças diretas na molécula de DNA
Nutrigenética
Modo como nosso organismo reage aos nutriente e moléculas bioativas presente na alimentação
Varia de acordo com as características genéticas de cada individuo. Um exemplo é a diferença presente entre cada população ao redor do mundo. Povos asiáticos possuem uma maior expressão de genes responsáveis pela codificação de enzimas que digerem amido, quando comparados com povos ocidentais.
Ácido nucléico
DNA
Fita dupla
ATGC
Síntese de RNA
RNA
AUGC
Fita simples
