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Cultivos celulares y su aplicaciones - Coggle Diagram
Cultivos celulares y su aplicaciones
Los cultivos celulares son esenciales para la investigación científica
permiten estudiar proceso que ocurren en las células, se puede utilizar en biotecnología, ingeniería de tejidos, etc
El primer paso para aislar células de un mismo tipo a partir de un tejido, separando la matriz extra celular que las mantiene unidas
la muestra de tejido es tratada con diversas enzimas protelíticas
Se utilizan agentes que secuestran al ion calcio del cual depende al adherencia celular
Se obtiene una suspensión celular que contiene a todas las células de este tejido mediante un agitado
Se conocen distintos métodos para separar los diferentes tipos celulares
Centrifugación: separa las células por tamaño
La capacidad de adherencia que tiene algunos tipos celulares
La union a ciertos anticuerpos específicos para determinados tipos celulares
La unión a ciertos anticuerpos acoplados a colorantes fluorescentes. Las células que contienen "marcadas" por los anticuerpos
La disección de un grupo de células a partir de una sección de tejido preparada para microscopía. La región que contiene a las células de interés es de círculo con las células que están por debajo
¿Cómo se cultivan las células?
La mayoría de las células animales y vegetales tiene la capacidad de vivir aisladas, multiplicarse y presentar propiedades diferenciales
Las células pueden ser observadas continuamente bajo microscopio o analizadas bioquímicamente para analizar los efectos del agregado o remoción de moléculas específicas
Se puede estudiar las interacciones entre la células cultivando en la misma placa más de un tipo celular
El cultivo de células comenzó en 1907 con un experimento diseñado para esclarecer una controversia en el área de neurología
El investigador Dr. Ross publicó un breve artículo que introdujo exitosamente una nueva técnica el cultivo de tejidos, para demostrar experimentalmente como se forman las fibras nerviosas
Estos experimentos se basaron el el cultivo de "explantos"
Cuando los experimentos se realizan con cultivos celulares se les denomina "in vitro", para diferenciarlos de aquellos que se levan a cabo en organismos completos "in vivo"
Los cultivos se establecen principalmente a partir de suspensiones celulares generadas por disgregación de tejidos
A diferencia de las bacterias, la mayoría de las células que forman parte de tejidos no pueden vivir en suspensión y requieren una superficie sólida sobre la cual crecer y multiplicarse
Cultivos primarios
Cultivos preparador directamente a partir de un tejido u órgano. Pueden iniciarse con o sin fraccionamiento previo para separar los distintos tipos celulares. Pueden retirarse del recipiente para formas cultivos secundarios
Cultivos secundarios
Las células suelen multiplicarse hasta cubrir la superficie del recipiente de cultivo formando una monocapa. Como consecuencia del contacto entre las células se detiene temporalmente su proliferación, hasta que se las subcultiva en un recipiente con medio fresco
En este estadío, las células mostrarán distintas propiedades según su origen
Cultivos continuos o líneas celulares
La mayoría de las células de los vertebrados deja de dividirse luego de determinado número de divisiones en cultivo (senescencia célular)
La capacidad limitada de proliferación es el resultado de un acortamiento progresivo de los telómeros
En las células somáticas se encuentra "apagado" el gen que codifica para la enzima telomerasa, como consecuencia los telómeros se acortan en cada división
A los fibrolastomas humanos se los puede forzar a proliferar indefinidamente se se les provee el gen que codifica para la telomerasa; así pueden propagarse como una línea celular "inmortalizada
La uniformidad genética en una línea celular puede mejorarse por clonado celular, a través del cual se aísla una sola célula, la que prolifera para formar una colonia de células clonales
Los hibridomas
Es posible fusionar dos células formando un heterocarionte, es decir, una célula con dos núcleos separados pero con los contenidos citoplasmáticos compartidos
Se trata de una suspensión de células con compuestos que inducen la fusión de membranas tales como el PEG o ciertos virus
Un heterocarionte puede entrar en mitosis, produciendo una célula híbrida en la cual las envolturas de ambos núcleos se han disgregado permitiendo juntar los cromosomas de ambos en un único gran núcleo
lLas células híbridas se pueden clonar pero se sabe que en muchos casos la línea resultante es inestable genéticamente
¿Qué contiene los medios de cultivos para el cultivo de células?
El cultivo de tejidos parecía ser producto de una mezcla de ciencia y alquimina
Los fluidos coagulados fueron reemplazados por placas con medios líquidos que contenían pequeñas cantidades de una serie de moléculas necesarias para la supervivencia y multiplicación celular: sales, glucosa, aminoácidos y vitaminas
La mayoría de los medios incluían una mezcla poco definida de macromoléculas
Se diseñaron medios libres de suero que poseen varias proteínas específicas para la supervivencia, desarrollo y proliferación
Los medio de cultivo son tamponados para mantener un pH alrededor de 7.4
¿En que recipientes se cultivan las células?
Cuando se cultivan células para un experimento se cultivan en frascos T típico de 175cm2 del que puede obtenerse aprox. 1x10^7 células adheridas
Es posible encontrar desde arreglos de frascos complejos en su estructura
En todos los casos en necesario asegurar el correcto intercambio de gases y la disponibilidad de nutrientes