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DNA RECOMBINANTE, image, image - Coggle Diagram

- - - - Ligação dos fragmentos ao vetor e introdução dos recombinantes na célula hospedeira
  - - - Possui 4 etapas:
        
        1-Síntese in vitro de cDNA de fita dupla
        
        2-Preparo dos cDNAs para ligação com vetor
        
        3-Introdução dos cDNAs recombinantes nas células hospedeiras (amplificação)
        
        4-Identificação dos clones por meio de triagem
- - - - ENZIMAS DE RESTRIÇÃO OU ENDONUCLEASES DE RESTRIÇÃO
        
        Enzima de restrição particular reconhece somente uma sequência única de bases
        
        Fragmentos de diferentes organismos podem ser ligados por renaturação das regiões de fita simples
        
        Os fragmentos poderão ser ligados permanentemente
        
        DNA ligase promove a ligação dos fragmentos de DNA em vetores previamente clivados por endonucleases de restrição
        
        Requer um grupo OH livre na 3' e um grupo fosfato na 5'
        
        Tipos de fragmentos
        
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        Vetores de clonagem do DNA
        
        Apresentam certas características que tornam excelentes veículos de clonagem
        
        Plasmídeos: Pequenas moléculas de DNA dupla fita, que apresentam elementos necessários para sua replicação e pelo menos um gene que confere resistência a antibióticos
        
        Deve conter origem de replicação
        
        Apresentar dois ou mais sítios únicos de clivagem para endonuclease de restrição
        
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        Após a infecção da E.coli o genoma do fago pode seguir duas vias:
        
        Estado lítico
        
        Estado lisogênico
        
        Cosmídeo: muitos genes apresentam dimensões da ordem de 35 a 40 kb e nestes casos, a técnica usada para a clonagem deste tipo de fragmento é a chamada clonagem em cosmídeos
        
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        São divididas em várias classes
        
        As enzimas do tipo II são as mais importantes
        
        Sequência palindrômica
        
        Há 2 tipos de clivagem
        
        Clivagem no eixo de simetria
        
        Clivagem simetricamente situada ao redor do eixo de simetria