Please enable JavaScript.

Coggle requires JavaScript to display documents.

4Channel Camera PCR, 시약 (Primer, Master Mix, CT DNA, DW), Materials &…

- - - - 기존의 Multiplex PCR
        
        각 스펙트럼에 해당되는 형광색소 필요
        
        다중화 검출시, 인접 파장대로 인한 크로스토크 현상
        
        광원에서의 여기광과 칩에서의 여기광 간섭 현상을 줄여아 함
        
        복잡한 설계 필요;;;
        
        셔틀 매커니즘을 기원하는경우
        
        스테퍼 모터, 커리우절 필터 휠 등등... 부가적인 요소들 필요
      - 만들 Multiplex 4channel PCR
        
        Chamber(PCR Chip)
        
        폴리프로필렌 사용
        
        검출이 가능한 면적이 넓어짐
        
        혼합샘플에 해당되는 여기 광을 구별하는 파장구역으로 나눠서 검출 가능해 진다.
        
        넓고 얇게 되어있어 빠른 온도변화 가능
        
        여기 유닛
        
        광원
        
        LED 사용
        
        복수의 파장 대로 서로 다른 형광 물질에 대응하여 챔버에 향에 광을 조사
        
        하우징
        
        복수의 여기 유닛이 45도
        
        조사각도 90도
        
        여기 필터
        
        광원 각각에 대응하여 특정 파장대역의 여기광 만을 통과시킬 수 있다.
        
        광원에서 방출되는 광의 특정 파장(여기 파장)만 통과하도록 필터링 하여 PCR 칩에 여기 광을 조사되도록 하였다.
        
        방출 필터
        
        스테인 글라스 형태처럼 배치
        
        모터가 필요없음
        
        좁은 면적의 포커싱을 위한 렌즈 및 부가적인 요소 필요없음
        
        간단한 구성, 광학적 길이 일정 하기때문에 높은 신뢰성을 갖는 검출 결과 얻을 수 있음
        
        검출부
        
        방출 필터에서 특정 파장을 필터링한 형광을 검출
        
        open platform인 CMOS pi cam을 사용
    - - 성능 입증
        
        이미지 해당 영역의 평균 밝기 변화를 관찰 및 응답성능 조사
        
        서로 다른 색상 간의 간섭 특성을 조사 (다중 형광에 대한 crosstalk 성능 검증)
        
        서로 다른 염료의 최대 농도와 혼합된 다양한 염료농도에 대한 형광 반응 측정
        
        정량 분석 성능
        
        표준 DNA 솔루션을 사용하여 검증
        
        Xavier System 과의 비교 고려
- - - - Excitation Unit
        
        White? LED
        
        Excitation Filter
        
        Chamber에 45도 각도로 조사
      - Emission Filter
        
        Stained glasses(4 devision)
        
        Chamber와 90도
      - Detection Unit
        
        CMOS pi cam 사용
        
        Open platform
        
        Emission Filter 뒤에 위치
        
        Chamber와 90도 각도
    - - PCB Chip
        
        폴리프로필렌
        
        얇고 넓게
      - Calibration Chip
        
        Calibration Chip 이용하여 Center point 고정
        
        고정된 Center point로 Chamber image를 4분할 하여 각 부분의 평균 밝기 구하기
- - - - Target 형광은 DW, 그 외 형광은 MAX Concentration + 모든 형광 MAX Concentration
      - 시약
        
        형광 시약
        
        ROX
        
        CY5
        
        HEX
        
        FAM
        
        몇 µl?
    - - 시약
        
        형광시약
        
        CY5
        
        HEX
        
        ROX
        
        몇 µl?
        
        FAM
      - 각 형광(FAM, HEX, ROX, CY5)에 대하여 [각 농도별 밝기 보기 ? MAX Concentartion 밝기 보기
  - - - 표준 DNA 솔루션을 사용하여 검증
    - - Primer
      - Master Mix
      - CT DNA
      - Nuclease Free Water
- - - - PCR Chip
        
        black matte pcb (이미 다른 논문에서 다룬 것이 있어서 레퍼런스로 참조)
        
        2.poly carbonate 로 제작한 reaction chamber (생물 적합성 문제로 사용) - PC : 성질은 투명하고 단단하다 (PP에 비해서)
        
        3.3M 1510 double sided tape
        
        poly carbonate housing
      - Stained Glasses(Emission Filter)
      - Emission filter와 Chamber의 구성도 (시스템 구성도 또는 배치도)
  - - - LED, Excitation Filter 을 포함하는 Excitation Unit 하우징
        
        솔직히 필요 없을듯(말로 기술)
    - - Figure 3
        
        기존의 많은 RT-PCR 장비들이 multi channel detection을 위해서 filter wheel등을 이용하여 detection을 한 경우가 많으나,wheel을 사용하기 위해서는 추가적인 motor control system이 필요하다. 그러나, 필터의 구성을 단순화하기 위해서 stained glass 형태의 filter를 구성하였다.
      - Figure 4
        
        Chamber와 Excitation Units들의 이루는각과, Emission Filter 및 Detection Unit이 이루는 각도
    - - Figure 5
        
        Excitation Units 와 Emission Filter 하우징과, Detection Unit이 결합된 형상
        
        Detection Unit
  - - - Stained Glass 형태의 방출 필터의 모습
        
        균일한 크기의 방출 필터가 보여짐
      - Chamber에 Reference 형광(Fam)을 주입 후 Excitation 하였을 시 Detection Unit 안의 Camera로 본 Chamber 형광 밝기 모습
- - - - (FAM, HEX, ROX, CY5) MAX Concentration 된 밝기값 + 모든 형광 DW
    - - Target 형광 하나의 (FAM, HEX, ROX, CY5) MAX Concentration 된 Chamber 사진 + 모든 형광 DW
        
        총 5개
  - - - Target 형광은 DW, 그 외 형광은 MAX Concentration + 모든 형광 MAX Concentration
        
        각 형광의 밝기값 및 Crosstalk 검증표????
        
        인접 파장대 Filter 유심히 살펴보기
    - - Target 형광은 DW, 그 외 형광은 MAX Concentration + 모든 형광 MAX Concentration
        
        사진 총 5개
  - - - Table 3, 4 && Graph1
        
        농도별 Cycle당 밝기값 및 다른 RealTime PCR 과 비교
      - Figure 9
        
        각 Cycle당 밝기값 비교??????