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MÉTODOS PARA DIAGNOSTICO DE VIRUS
MICROSCOPIA ELECTRÓNICA
Gracias a este podemos observar la morfología de los viriones presentes en muestras clínicas.
Si la concentración de virus es baja se agregan anticuerpos específicos, formando agregados que permite visualizarlos.
DETECCIÓN DE ANTÍGENOS
DETECCIÓN DE ANTÍGENOS
Método directo.
Utilización de un anticuerpo específico antiviral conjugado una molécula marcada
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS
Método Indirecto.
Se emplea un anticuerpo marcado. La reacción debe llevarse acabo sobre un cultivo celular, el cuál debe de estar infectado por el virus que desea estudiarse.
Anticuerpos fluorescentes
INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA
A las muestras clínicas se les tiene que agregar anticuerpos marcados con isotiocianato de fluoresceína
éstas se combinan con los antígenos víricos localizados en el interior de la célula
Finalmente la reacción Antígeno- Anticuerpo se visualiza con el microscopio de fluorescencia (en color verde manzana).
CULTIVO CELULAR
Proceso por el cual es posible cultivar en condiciones controladas a células tanto procariotas como eucariotas
Líneas celulares primarias
Células aisladas de un tejido y que proliferan en condiciones apropiadas
Conforma crecen y se multiplican hay que pasarlas a otro recipiente para que sigan creciendo
Líneas celulares continuas
Se seleccionan aquellas células que presentan un mayor potencial de crecimiento y cuentan con el potencial de multiplicarse indefinidamente
Pueden subcultivarse de forma seriada sin perder su capacidad de crecer
Líneas celulares finitas
Se le denomina así a los cultivos que cuentan con la capacidad de subcultivarse alrededor de unas 50 veces aprox.
Citología e histología
Citología
Papanicolau
Giemsa
Anticuerpos fluorescentes
Más sensible
Hematoxilina y eosina
Tejidos
PRUEBAS INMUNOLOGICAS
Las pruebas inmunológicas pueden ser las siguientes:
-Antigeno:para detectar anticuerpos contra un patogeno en una muestra del paciente
-Anticuerpo:para detectar un antigeno del patogeno en una muestra del paciente
EJEMPLOS:
Pruebas de aglutinación
Bacterias o virus se acoplan con un reactivo antigénico o un anticuerpo. La partícula compleja formada se mezcla con la muestra (p. ej. líquido cefalorraquídeo o suero) si el anticuerpo o el antígeno buscados están presentes en la muestra, producirán el entrecruzamiento de las partículas, lo que se observa como una aglutinación.
Fijación del complemento
Mide la cantidad de anticuerpos consumidores de complemento (o que lo fijan) de una muestra de suero o líquido cefalorraquídeo. Se usa para el diagnóstico de algunas infecciones virales o micóticas, especialmente para la coccidioidomicosis.
La prueba permite medir los títulos de anticuerpos IgM e IgG, o puede modificarse para detectar determinados antígenos
Enzimoinmunoensayos
Utilizan anticuerpos unidos a enzimas para detectar antígenos, y para detectar y cuantificar anticuerpos. Algunos ejemplos son.
-Enzimoinmunoensayo (EIA)
-Ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA)
Las sensibilidades de estas pruebas, aunque suelen ser bastante elevadas, pueden variar de acuerdo con la edad del paciente, el serotipo del microorganismo o el estadio clínico de la enfermedad.
Pruebas de precipitación
Miden la cantidad de antígeno o de anticuerpo en los líquidos corporales a partir del grado de precipitación visible de complejos de antígeno-anticuerpo dentro de un gel de agarosa o en solución. Hay muchos tipos de pruebas de precipitación (p. ej. doble difusión de Ouchterlony, contrainmunoelectroforesis), pero sus aplicaciones son limitadas
Prueba de inmunotransferencia de Western
La prueba de Western blot detecta anticuerpos contra el microorganismo en una muestra del paciente (que puede ser suero u otro líquido corporal) mediante su reacción con antígenos blanco (p. ej. componentes virales) que se hallan inmovilizados en una membrana mediante electrotransferencia
Algunas son:
-El inmunoensayo lineal (LIA)
-Ensayo de inmunotransferencia recombinante (RIBA), que utiliza antígenos sintéticos o recombinantes
-Los ensayos de inmunocromatografía, que pueden evaluar rápidamente las muestras para detectar los antígenos microbianos específicos o los anticuerpos del paciente
Detección y cuantificación de ácidos nucleicos
Sondas de ácidos nucléicos
Determinaciones de ácidos nucleicos virales por sonda sintética
Amplificación de ácidos nucleicos virales mediante una reacción de cadena de polimerasa (PCR)
(Equipo 2)
