RECURSOS DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA SOLICITADOS PARA LLEGAR AL AGENTE ETIOLÓGICO:
PCR (Reacción en cadena de la polimerasa): Es una técnica de amplificación del genoma de ADN (RT-PCR para genomas de ARN). Amplifica copias simples de ADN vírico varios millones de veces y constituye una de las técnicas más útiles del análisis genético. Tiene una sensibilidad tan alta que puede amplificar una única molécula de DNA y una sola copia de genes puede ser extraída, de mezclas complejas de secuencias genómicas y visualizada como bandas diferentes en geles de agarosa.
Inmunofluorescencia indirecta: Es un método rápido y confiable para la determinación de anticuerpos antivirales en el suero del paciente.
Se basa en la unión de anticuerpos antivirales presentes en el suero del paciente a los antígenos virales expresados en la superficie y citoplasma de célulasinfectadas, que han sido fijadas a un portaobjeto de vidrio. Como control de especificidad se usan células no infectadas.
El procedimiento es el que sigue: Se incuba el suero del paciente con las células infectadas y no infectadas. Luego se realiza un lavado con PBS y se agrega posteriormente anticuerpo anti IgG humana conjugada con isotiocianato de fluoresceína. El isotiocianato de fluoresceína es una sustancia que se vuelve fluorescente a la exposición de la luz ultravioleta y emite una luz verde característica. El conjugado se unirá a los anticuerpos del paciente si la reacción es positiva, leyéndose la prueba en un microscopio de fluorescencia. La presencia de Ac se evidencia por la aparición defluorescencia en el citoplasma y superficie de las células infectadas, mientras que las células control no fluorescen.
Enzimoinmunoanálisis indirecto: Tiene las ventajas de ser un método versátil, relativamente económico, sensible y de lectura objetiva (instrumental). La metodología es la siguiente: Los antígenos virales se inmovilizan sobre una fase sólida (esferita, policubetas para microtitulación u otros elementos de plástico) y se agregan los sueros en estudio; se incuban, se lavan y se revela la reacción Ag-Ac por el agregado deuna inmunoglobulina antiespecie conjugada con una enzima,seguida por el substrato apropiado para esta. Los resultados se pueden leer con un espectrofotómetro y en algunos casos de forma visual.