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DIAGNOSTICO EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA - Coggle Diagram
DIAGNOSTICO EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
Preparación en fresco
Preparación no teñida se estudia mediante microscopia de campo claro, de campo oscuro o de contraste de fases.
permite observar microorganismos vivos y ciertas funciones fisiológicas, como la movilidad, así como apreciar sus distintas formas, tamaños y agrupaciones.
La muestra se suspende en agua o solución salina
Se utiliza principalmente para la visualización de bacterias, hongos unicelulares, protozoos y helmintos.
TINCIONES
KOH al 10%
Se utiliza KOH para disolver el material proteináceo y facilitar la detección de elementos fúngicos que no se ven afectados por la solución alcalina fuerte
Se agrega un líquido que contiene el químico hidróxido de potasio (KOH).
Luego se examina el portaobjetos bajo el microscopio. El KOH ayuda a disolver mucho del material celular
muestras como:
Pelos
Escamas
Uñas
Tinción Gram
Es un conjunto de procedimientos
físico-químicos, de técnica sencilla
con el uso de colorantes
Para observar la morfología y
estructura de bacterias
Su nombre se debe al
bacteriologo Danés Christian
Gram (1884)
GRAM POSITIVO
Peptidoglucano
Ácido Murámico
Ácidos teicoicos
MG+
Disminución del diámetro de los poros
del peptidoglucano
Capacidad de teñirse con Violeta
de genciana o cristal violeta
Pigmentación
violáceo
GRAM NEGATIVO
Contiene poco peptidoglucano
Lipopolisacáridos
Lipoproteinas
Membrana externa
Permitiendo la extracción del
complejo violeta-lugol por acción del alcohol
no retiene el color violeta
Poros amplios de la pared bacteriana aún
contacto con el alcohol o cetona
Se tiñe de color
Fucsina básica
Procedimiento
Frotis (muestra)
Fijarlas a las llamas del mechero
Agregar 1er colorante 2 a 3 gotas de
violeta de genciana por 3min
Enjuagar con agua
Agregar 2 gotas de lugol por 30seg a 1min
Lavar con agua destilada
Agregar 1 a 2 gotas de alcohol acetona
por 3 seg a 1min
Enjuagar con agua
Tinción de colorante, 2do colorante, aplicar 2
gotas de Safranina o fucsina básica por 1 a 3min
Este tiene dejará de color rosado-rojizo a las bacterias
Gram -
Lavar con agua
Escurrir
Observar al microscopio
TINCIÓN TINTA CHINA
Modificación del procedimiento de KOH
Se añade tinta china como material de contraste.
depositar una gota de la muestra sobre un portaobjetos, y se coloca el colorante, se observa al microscopio sin necesidad de fijacion
Cryptococcus en LCR y otros líquidos corporales
TINCIÓN YODO DE LUGOL
Se añade yodo a preparaciones en fresco de muestras de parasitología
Se usa para mejorar el contraste de las estructuras internas.
Facilita la diferenciación entre las amebas y los leucocitos del huésped
Tinción de hematoxilina férrica
Se utiliza para la detección e identificación de protozoos fecales.
Colorea protozoarios amebas y flagelados
Observación: El citoplasma de los parasitos se observan de color azul oscuro y el núcleo de color morado intenso a negruzco
Procedimiento
:
Sumergir los portaobjetos en:
Agua del grifo 5 minutos
Agua destilada durante 1 minuto
Solución de ácido picrico durante 1 minuto
En agua del grifo dejandola correr durante 10 minutos; en
En alcohol al 70% que contiene una gota de amoniaco durante 5 minutos
Alcohol al 95% durante 5 minutos.
Deshidratar con etanol al 100% y xileno o con la mezcla carbol xileno.
Cubrir el frotis con un cubreobjetos, usando medio de montaje de resina
Alcohol al 50% durante 2 minutos
Alcohol al 70% durante 5 minutos.
Solución de trabajo de tinción de hematoxilina durante 10 minutos
Tinción de Wright-Giemsa
Tinción policromática que contiene una mezcla de azul de metileno, azur B y eosina.
Utilizado en estudios de:
Frotis de sangre periférica
Frotis de médula ósea.
Los diferentes colores que se observan en la célula provocan el llamado efecto Romanowsky, que tiñe de purpura a los núcleos y gránulos neutrofílicos y de color rosa al citoplasma
Procedimiento
Tinción de la muestra
Tinción de Wright
Cubrir la muestra con el colorante Wright, dejar reposar 5 min.
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Tinción de Giemsa
Diluir 1/10 de Giemsa en agua (*preparación contiene metanol)
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Fijar el frotis con alcohol metílico de 3-4 min.
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Tinción de Ziehl-Neelsen
Colorantes
En la tinción de Ziehl-Neelsen se utiliza el compuesto fenólico carbol fucsina, un colorante básico.
Este tiene la capacidad de interactuar con los ácidos grasos de la pared celular, la cual es de textura cerosa a temperatura ambiente.
Procediemiento
se coloca carbol-fuscina y se calienta la preparación
se enfria con agua
lo que sucedió fue la apertura y solidificación de la pared celular
Procediemiento tintorial, sencillo y accesible.
Utilizado para el diagnostico etiológico de enfermedades microbianas
Tinción Auramina-rodamina
Técnica histologica utilizada para visualizar bacilos acidorresistentes mediante microscópica de fluorescencia , en particular especies del género Mycobacterium
Procedimiento
Extensión.
Lavar con agua destilada.
Desecación.
Fijación. Dejar enfriar.
Coloración: Cubrir la preparación con el colorante auramina-rodamina previamente filtrado. Mantenerlo así durante 15 min. No hay que calentar.
Decoloración con alcohol -HCl. Cubrir la preparación con el decolorante y dejar actuar de 3 a 4 minutos.
Lavar con agua destilada.
Añadir permanganato potásico al 0,5% en agua destilada y dejar actuar de 2 a 4 minutos. El permanganato se utiliza para eliminar la fluorescencia residual de los desechos de fondo. Pero debe evitarse el tratamiento excesivo con el contra colorante porque puede rebajar la intensidad fluorescente de los bacilos coloreados.
Lavar con agua destilada.
Secar al aire y observar con el microscopio de fluorescencia.
