Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
EXTRACCIÓ I PURIFICACIÓ D'ÀCIDS NUCLEICS - Coggle Diagram
EXTRACCIÓ I PURIFICACIÓ D'ÀCIDS NUCLEICS
Pretractament de les mostres biològiques
Sang (mostra més comuna)
Lisi d'hematies
Obtenció de cèl·lules mononucleades de sang perifèrica
Cultius cel·lulars
En monocapa
En suspensió
Teixits animals o vegetals frescs
Homogeneïtzació mecànica
Homogeneïtzació química
TEIXITS FIXATS EN FORMOL I
INCLOSOS EN PARAFINA (FFPE)
Altres mostres
Cultius de bacteris i llevats
Cèl·lules de la mucosa oral
Esput
Extracció d'àcids nucleics
Solució de lisi
Detergents
EDTA
Proteases
(Proteïnasa K)
Agents caotròpics
TRACTAMENT EN CÈL·LULES AMB
PARET CEL·LULAR
Tractaments mecànics
Tractaments enzimàtics
Tractament CTAB
Purificació d'àcids nucleics
Purificació amb solvents orgànics
passos:
Eliminació de compostos solubles
Precipitació de l'ADN
Rentat de l'ADN
Resuspensió de l'ADN
Purificació amb sals (salting-out)
passos:
Precipitació de proteïnes
Precipitació de l'ADN
Rentat i resuspensió de l'ADN
Cromatografia d'intercanvi iònic
Cromatografia d'adsorció
Ultrafiltració
Purificació mitjançant esferes magnètiques
Per afinitat
Per adsorció
Purificació de plasmidis
: pasos
Lisi alcalina
Neutralització ràpida
Purificació de l'ADN plasmidic
Acabada la purificació
Qualitat dels àcids nucleics
Puresa
(Espectrometria)
Absorbància 260: àcids nucleics
Absorbància 280: proteïnes
Absorbància 230: terbolesa, partícules en suspenió
Integritat
(Electroforesi en gel d'agarosa)
ADN genòmic
ADN plasmidic
ARN
Concentració dels àcids nucleics
Absorbància 260
[AN] = (A260 + A320) · factor de dilució · factor de conversió
Quantitat AN (ng) = [AN] (ng/ µL) · V resuspensió (µL)
Mètode de fluorescència: ADNds
Funcionalitat dels àcids nucleics
Emmagatzament dels àcids nucleics
Integritat
Traçabilitat