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TÉCNICA ELISA, image, image - Coggle Diagram
TÉCNICA ELISA
materiales necesarios
recomendaciones
purificación de la muestra, si bien no es indispensable es necesario para la calidad de la muestra, pueden ser purificadas con base en: con base en su solubilidad, tamaño, carga y afinidad de unión
-
pasos generales
- reconocimientos antígeno-anticuerpo
-
- antígeno
- anticuerpo
- enzima
- producto colorimetrico
- se utilizan equipos ópticos como lectores de microplacas o espectrofotómetros ELISA.
ventajas
desventajas
- no son altamente específicos
- pueden dar falsos positivos debido a la reactividad cruzada del anticuerpo detector con otras proteínas de la muestra
- se adaptan a un mayor rendimiento con sistemas automatizados de manipulación de detección de placas
- técnicamente son menos dificiles que los western blots
qué es?
ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (en inglés enzyme-linked immunosorbent assay) es un método sensible para la
cuantificación de proteínas
fundamento
consiste en la detección de un antígeno a través de un anticuerpo enlazado a una enzima, mediante algún producto detectable, como, por ejemplo, el cambio de color
se usa para:
la medición de
anticuerpos, antígenos, proteínas y glicoproteínas en muestras biológicas.
- diagnosticar enfermedades y virus tanto en humanos como en animales
- detección de alérgenos en alimentos
- detectar proteínas nativas e interacciones proteicas en su estructura 3ra o 4ria
- estudiar competencia de unión
tipos de elisa
es la forma más básica de realizar la técnica.
se aplica el anticuerpo con la enzima y se compara con los controles
-
utiliza un conjugado, un antígeno del analito acoplado a un reactivo de detección, que compite con el analito por la unión. cuanto mas analito contenga la muestra, menos conjugado se unirá y menor será la señal mediada por la enzima
-
es la forma más eficaz de realizar la prueba.
En este caso primero se añade un anticuerpo y después la muestra, para que los antígenos queden ya retenidos en el fondo del pozo. Después se añade el anticuerpo con la enzima.
