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PRUEBAS DE SEROLOGÍA Y AGLUTINACIÓN - Coggle Diagram
PRUEBAS DE SEROLOGÍA Y AGLUTINACIÓN
Pruebas de hemaglutinación: Tipificación sanguínea
INDICACIONES: Reactivo del grupo ABO monoclonal, para técnica en placa, tubo, tarjeta de gel inerte y microplaca.
DESCRIPCIÓN:
Se produce aglutinación directa de los glóbulos rojos de prueba
que porten el antígeno ABO correspondiente.
La ausencia de aglutinación generalmente indica la ausencia del antígeno ABO correspondiente.
RECOLECCIÓN Y MANIPULACIÓN DE LAS MUESTRAS
Proceda a la toma de sangre o suero utilizando procedimientos clínicos de rutina.
Utilice la sangre directamente.
Pueden permanecer
a temperatura ambiente hasta a por 8 horas
Refrigeradas (2° - 8°C) hasta por 7 días
o en caso de que no se utilice inmediatamente la muestra, se podrá congelar a –20 grados
Evite dañar la muestra congelando y regresando a temperatura ambiente en repetidas ocasiones.
Cualquier sedimento en muestras deberá ser removido por centrifugación. Evite utilizar muestras con turbidez, las cuales pueden estar contaminadas por microorganismos.
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA
TÉCNICA EN PLACA
Agregue una gota de sangre por una gota de reactivo.
Mezcle generosamente la placa que contiene el reactivo y muestra en un círculo de aprox. 2cm. de diámetro. Lea macroscópicamente después de 2 minutos.
En caso de tener resultados aparentemente negativos, lleve a cabo la lectura microscópica después de 5 minutos.
Una suspensión de 35-45% de células rojas de sangre en suero o plasma deberá ser evaluada.
TÉCNICA EN TUBO
Agregue en un tubo previamente identificado una cantidad igual de reactivo y muestra (suspensión al 3% - 5%).
Mezcle e incube a 18° - 23°C por un minuto.
Centrifugue a 1000 rpm por 20 segundos o similar.
Agite generosamente el tubo para facilitar la lectura macroscópica por aglutinación.
TÉCNICA CON CENTRIFUGACIÓN
Agregue en un tubo previamente identificado una cantidad igual de reactivo y muestra (suspensión al 3% - 5%).
Mezcle e incube a 18° - 23°C por un minuto.
Agite generosamente el tubo para facilitar la lectura macroscópica por aglutinación.
TÉCNICA CON MICROPLATO
Prepare una suspensión (3-5%) de células rojas en una solución Fosfatasa Buffer Salina o Solución Iónica de baja concentración (al 1-2%)
Agregue una gota (35-40 microlitros) de reactivo a los micro platos.
Agregue la misma cantidad de células en suspensión a los micro platos.
Mezcle el contenido utilizando técnicas manuales o con un agitador de micro platos. (El tiempo estará en función del tiempo y la órbita del agitador)
Incube a temperatura ambiente los micro platos por 15-20 minutos.
Centrifugue los micro platos por 40 segundos a 100 rpm o similar.
Resuspenda utilizando el agitador de micro platos.
Lea la prueba macroscópicamente o con lector automático.
Pruebas de aglutinación: Proteína C Reactiva, ASTO, LÁTEX, Factor Reumatoideo, VSG
PCR-Latex
prueba rápida de aglutinación en porta
basada en la técnica de Singer
detección directa y la
semicuantificación de la proteína C-reactiva (PCR) en suero.
consiste en
suspensión de látex
recubierto con anticuerpos anti-PCR, frente a los sueros problema.
Aglutinación:
aumento del nivel
de PCR por encima del límite superior
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
Conservar a 2-8 grados.
No congelar los componentes del kit ya que podría verse afectada la funcionalidad del test.
MUESTRAS
Suero claro, reciente.
Una vez separado, el suero puede guardarse a 2-8oC durante una semana antes del ensayo, o por un período mayor a –20 grados
EQUIPO ADICIONAL
Pipetas de volumen variable.
Solución salina (NaCl 0,9%, para técnica semi-cuantitativa).
Agitador mecánico rotatorio de velocidad regulable a 100 r.p.m.
Cronómetro.
TECNICA
Prueba cualitativa
Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente
Resuspender el vial de látex con suavidad. Aspirar y vaciar varias veces el cuentagotas para asegurar su homogeneidad antes del ensayo.
Depositar 1 gota (50 L) de suero problema en uno de los círculos de la tarjeta visualizadora. En círculos adicionales depositar 1 gota de control positivo y 1 gota de control negativo
Añadir a cada círculo 1 gota del Reactivo PCR-Latex, próxima a la muestra a analizar.
Efectuar la mezcla con ayuda de un palillo desechable, extendiéndola de forma que cubra por completo la superficie interior de cada anillo. Emplear palillos distintos para cada mezcla
Mover la tarjeta con agitador rotatorio (100 r.p.m.) durante 2 minutos
Observar de inmediato con la ayuda de una luz adecuada, la aparición de cualquier signo de aglutinación.
Lectura
Reacción negativa: Suspensión uniforme sin cambio visible alguno, tal como se presenta en el control negativo
Reacción positiva: Aglutinación débil o intensa, fácilmente visible macroscópicamente
Prueba semi-cuantitativa
Diluir la muestra en NaCl 9 g/L siguiendo la pauta de diluciones
VALORES ESPERADOS
En las personas sanas la concentración de proteína C- reactiva en el suero es inferior a 5 mg/L, durante algunas enfermedades, dentro de las 4-8 horas subsiguientes a un episodio agudo, estos valores aumentan y la concentración de PCR en suero puede llegar hasta 500 mg/L.
Dado que un nivel elevado de PCR siempre esta ligado a cambios patológicos, la determinación de la PCR tiene un gran valor para la confirmación del diagnóstico, el tratamiento y el control de la evolución de las enfermedades
ASO-látex
SIGNIFICACIÓN CLÍNICA
anticuerpo antiestreptolisina O se encuentra presente en casi todas las personas en títulos bajos, debido a que las infecciones estreptocócicas son comunes
un título alto o creciente de antiestreptolisina O, indica una infección reciente producida por un estreptococo beta hemolítico de grupo A, como amigdalitis, escarlatina, sepsis puerperal, erisipela.
FUNDAMENTOS DEL METODO
Los anticuerpos antiestreptolisina O se detectan en suero por su reacción con la estreptolisina O adsorbida sobre soporte inerte de látex
. Los anticuerpos antiestreptolisina reaccionan con la estreptolisina produciendo una aglutinación visible macroscópicamente
REACTIVOS PROVISTOS
A. Reactivo A: suspensión de partículas de látex poliestireno recubiertas con estreptolisina O.
Control Positivo*: suero conteniendo antiestreptolisina O en concentración superior a 250 UI/ml.
Control Negativo*: dilución de proteínas séricas no reactivas.
INSTRUCCIONES PARA SU USO
Reactivo A: homogeneizar por agitación intensa y luego cambiar la tapa ciega por la tapa gotero suministrada adicionalmente.
Controles Positivo y Negativo: listos para usar.
MUESTRA
Suero
a) Recolección: obtener suero de la manera usual.
b) Aditivos: no se requieren.
c) Sustancias interferentes conocidas: los sueros marcadamente lipémicos o contaminados pueden dar resultados
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la antiestreptolisina en suero es estable 24 horas refrigerada
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
Negativo: suspensión homogénea.
Positivo: aglutinación que aparece dentro de los 2 minutos.
Se califica de 1 a 4 +.
Título: inversa de la máxima dilución a la que se produce aglutinación visible macroscópicamente.
El nivel aproximado de antiestreptolisina O en la muestra, puede ser calculada por la fórmula siguiente:
ASO (UI/ml) = Título x Sensibilidad de la reacción (200 UI/ml)
VALORES DE REFERENCIA
Hasta 200 UI/ml
Factor Reumatoideo
PRINCIPIO DEL METODO
El FR-Látex es una técnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de los factores reumatoideos (FR) en suero humano.
En las muestras séricas que contengan mas de 8 UI/mL de FR se hará visible una clara aglutinación de las partículas de látex recubiertas de gammaglobulina humana
SIGNIFICADO CLINICO
Los factores reumatoideos son un grupo de anticuerpos que reaccionan predominantemente contra el fragmento Fc de las las propias inmunogloblinas G.
Presente en pacientes con artritis reumatoide y es importante
no son específicos y pueden aparecer con mas baja frecuencia entre otras en enfermedades autoinmunes y en procesos inflamatorios cronicos
REACTIVOS
R Suspensión de partículas de látex cubiertas con gamma globulina humana, pH 8,2. NaN3 0,95 g/L.
Control + Suero humano, FR > 25 UI/mL. NaN3 0,95 g/L.
Control – Suero animal. NaN3 0,95 g/L.
PROCEDIMIENTO
Método cualitativo
Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente.
Depositar 50 μL de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de los controles Positivo y Negativo, sobre círculos distintos de un porta
Homogeneizar suavemente el reactivo de FR- látex antes de usar. Colocar el vial en posición vertical y depositar una gota (50 μL) junto a cada una de las gotas anteriores.
Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del círculo.
Situar el porta sobre un agitador rotatorio a 100 r.p.m. y agitar durante 2 minutos.
Método semicuantitativo
Las muestras positivas pueden ser tituladas. El título se define como la dilución mayor que da resultado positivo.
Realizar diluciones dobles de la muestra en NaCl 9 g/L.
Proceder para cada dilución, como en la prueba cualitativa.
La concentración aproximada de FR en la muestra del paciente puede obtenerse multiplicando el título obtenido por 8 UI/mL.