Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
Pp Sắc Ký Lớp Mỏng, PP SẮC KÝ CỘT - Coggle Diagram
Pp Sắc Ký Lớp Mỏng
a) Chấm mẫu lên tấm bản mỏng:
Nếu mẫu là chất rắn
Hòa tan mẫu trong dung môi hữu cơ phù hợp (2-5%)
Nếu mẫu là chất lỏng
Lấy mẫu
Chấm trực tiếp trên bản mỏng
Cắt bản mỏng (5x2cm)
Kẻ 1 đường thẳng dưới bản bằng bút chì, cao 1cm -> Vạch xuất phát
Vẽ 1 đưởng thẳng trên bản, cao 0.5cm -> Vạch tiền tuyến dung môi
Chấm vi quản vào dung dịch mẫu
Chạm nhẹ đầu vi quản lên tấm bản mỏng tại vạch xuất phát, sau đó nhấc lên nhanh
Để vết chấm lan thành vết tròn (đường kính tầm 2-5cm)
Sấy cho bay hết dung môi
Nhúng vào dung dịch giải ly
*Nếu cần khảo sát nhiều mẫu cùng lúc chỉ cần chấm mỗi mẫu 1 vết trên bản mỏng ( mỗi vết cách nhau 1cm, hai vết nằm ngoài rìa 2 bên thì cách bìa bản mỏng 1,5cm).
c) Hiện hình các vết thấm mẫu
PP vật lý
Dùng tia tử ngoại(UV)
PP hóa học
Dùng các loại thuốc thử đặc trưng (I2, dd H2SO4 50%, dd FeCl3...)
Hiện hình = hơi I2
Đặt bản mỏng vào bình chứa hơi I2
Quan sát màu
Hiện hình = dd FeCl3/ dd H2SO4 50%
Nhúng bản mỏng vào lọ chứa thuốc thử
Lấy ra, lắc nhẹ cho chảy hết thuốc thử
Nướng bản mỏng (=máy sấy/bếp điện)
b) Giải ly bản mỏng
Pha dung môi phù hợp
Cho vào bình giải ly (có sẵn giấy lọc). Xong đảo nhẹ.
Đặt bản mỏng vào bình, sao cho ngập dung môi nhưng ko đc ngập vết chấm mẫu
Đợi đến khi dung môi đến vạch tiền tuyến thì dừng giải ly
Sấy khô
PP SẮC KÝ CỘT
Sắc ký cột hở (Open-column chromatography)
Chọn dung môi để sắc ký cột
Mẫu đc hòa tan trong dung môi phù hợp =dd mẫu (A)
Chấm lên 5-6 tấm bản mỏng
(khoảng cách mỗi chấm là 2-5μl)
Giải lý các bản với các dung môi/hệ dung môi phù hợp
Hiện hình các vết = UV or thuốc thử
(nồng độ 10mg/ml)
Nếu là mẫu cao khô có chiết xuất từ cây cỏ (chứa các hợp chất ít phân cực đến phân cực)
Nên chọn dung môi giải ly đầu tiên
đẩy vết ít phân cực nhất với Rf = 0,5.
Chọn dung môi dừng sắc ký cột
Có thể đẩy vết phân cực nhất với Rf = 0,2.
Đặt mẫu chất cần tách lên đầu cột
Cho mẫu cao + 1 ít silica gel vào cối
Nghiền mịn, rồi cho vào cột
Dùng 1 ít dung môi thấm ướt bột mẫu đã nghiền
Cho dung môi đầy cột, bắt đầu giải ly
Hứng dung dịch giải ly trong lọ thủy tinh, lọ/50ml
Dùng sắc ký lớp mỏng gom các lọ thành phân đoạn có kết quả giống nhau.
(có đánh số thứ tự)
(dung môi đầu tiên để chạy cột)
Nạp chất hấp thu dạng sệt vào cột
Dùng bông gò chặn đầu ra của cột lại
Cho chất hấp thu vào becher có sẵn dung môi
(cho từ từ 1 lượng nhỏ đều đặn, vừa rót vừa khuấy/ dùng dung môi đầu tiên cho giải ly cột)
Rót hỗn hợp sệt lượng vừa đủ vào cột = phễu lọc
(vừa rót vừa dùng thanh cao su gõ nhẹ bên ngoài thành cột để chất hấp thu nén đều trong cột )
Mở nhẹ khóa dưới cột để dung môi chảy ra + hứng becher trống để dưới cột
(dung môi còn thừa trong becher này sẽ được rót trả lại lên đầu cột)
Lặp lại các bước trên tầm 3 lần
(để việc nạp cột đc chặt chẽ nhằm lm chất hấp thu trong cột đc đồng nhất)
Nạp xong, kiểm tra mặt thoáng chất hấp thu ở đầu cột phải nằm ngang và bằng phẳng
Sắc ký nhanh - cột khô (Dry-column flash chromatography)
a) Nạp chất hấp thu vào cột
Hệ thống gồm phễu lọc xốp gắn trên erlen nối với máy bơm hút tạo chân ko (cho máy hoạt động)
Cho từ từ silica gel vào phễu
Đè nén nhẹ silica gel xuống đáy phễu
(mỗi lần một ít, từng lớp tạo thành khối rắn chặt chẽ, đồng nhất và phẳng, chiều dày lớp silica gel 5cm)
b) Cân bằng cột sắc ký
Nạp pha tĩnh xong, đặt 1 lớp bông gòn đày lên bề mặt cột (để bảo vệ lớp mặt)
Cho dung môi ít phân cực (loại dung môi dùng để giải ly đầu tiên) lên đầu cột, mở máy bơm
Dung môi đc hút xuống erlen. Thực hiện vài lần các bước này
Đến khi chất hấp thu trong cột đc đồng nhất thì dừng
Cột đã cân bằng
c) Nạp mẫu lên đầu cột - Giải ly cột
Nạp mẫu
Cho từng lượng nhỏ silica gel vào cao thô ban đầu
Nghiền thành bột mịn
Lấy bông gòn ra khỏi cột, cho bột đã nghiền vào đầu cột
Trải đều bột thành lớp mỏng
Phủ lớp bông gòn lại mặt cột
(lm bề mặt ko bị xáo trộn khi giải ly)
(Ko đc đè nén quá)
Giải ly
Cho máy bơm hoạt động
Rót vừa đủ dung môi lên phễu
Ngắt áp suất khi máy bơm rút hết dung môi
Rót dung dịch vừa giải ly trong erlen ra các lọ
(có đánh số thứ tự)
Gắn phễu vào hệ thống, rót dung môi
Bật máy bơm, hút khô phễu
1 more item...