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Método de Southern blot - Coggle Diagram

- - - - 1º Passo
        
        Transferir o DNA para um filtro de nitrocelulose ou náilon
        
        é necessário colocar a membrana sobre o gel e aplicar pressão uniformemente distribuída sobre o gel, levando à ligação do DNA à membrana.
      - 2º Passo
        
        O gel é mergulhado em uma solução de hidróxido de sódio
        
        O fluxo gerado pela solução faz que o DNA se desprenda da matriz e seja transferido para a membrana (náilon ou nitrocelulose)
      - 3º Passo
        
        Hibridização por sonda
        
        sonda é um pequeno pedaço de DNA que é projetada para ter uma sequência complementar a sequência particular do DNA na amostra
        
        Isto permite que a sonda hibride ou se ligue a um fragmento de DNA específico na membrana.
        
        A sonda possui um marcador, que normalmente é um átomo radioativo ou um corante fluorescente.
        
        Vai ser observado no filme de raio X - Consegue saber qual o tamanho da sequência e os genes.
        
        A técnica de hibridação é importante para analisar genes expressos assim como genes não expressos na amostra. A visualização destes genes de interesse dá-se pelo emparelhamento das sondas que se encontram marcadas.
        
        Após a hibridação, a sonda permite que o fragmento de DNA de interesse seja detectado entre os muitos fragmentos de DNA diferentes na membrana. Essa sonda irá parear com qualquer sequência de DNA complementar a ela. Portanto se a sequência procurada não estiver presente na amostra não houve o pareamento.
        
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        Se dá por complementariedade, se a sequência for complementar, ela se liga ao DNA.
      - 2º Passo
        
        A membrana é aquecida (no caso da utilização de uma membrana de nitrocelulose) ou exposta a radiação UV (no caso da utilização de uma membrana de nylon) para fixar permanentemente o DNA à membrana.