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Identificación de levaduras - Coggle Diagram
Identificación de levaduras
Criterios morfológicos
Observación macroscópica:
se observa el aspecto de las levaduras en los diferentes medios de cultivo. en un cultivo de SDA son planas o ligeramente convexas, e consistencia cremosa y olor, con textura lisa o rugosa y color blanquecino
Observación microscópica
Visualización de hifas y esporas:
la formación de pseudohifas o hifas verdaderas o de distintos tipos de esporas es una característica morfológica que permite la identificación definitiva o presuntiva de algunas especies de levaduras
Prueba del túbulo germinal o de filamentación precoz:
el tubo germinal es una extensión filamentosa de la levadura, sin estrechamiento en su origen. Su anchura suele ser la mitad de la que tiene la célula progenitora, y su longitud es 3 o 4 veces mayor. Sólo
Candida albicans
los produce
Tinciones:
las más habituales son la de Gram, con la que las levaduras se comportan como grampositivas, y la de azul de lactofenol
Identificación mediante criterios bioquímicos
Pruebas para la identificación de
Candida
:
Candida
es un género muy extendido y responsable de muchas de las micosis sistémicas que pueden comprometer la vida de pacientes inmunodeprimidos
Medios cromogénicos:
Sustrato cromogénico + indicador enzimático hacen que una levadura sembrada en un medio forme colonias de un color u otro según su actividad enzimática
Medios flurogénicos:
basados en la incorporación de un componente en el medio que, al ser hidrolizado por una enzima fúngica, produce un metabolito fluorescente que se ve al iluminarlo con luz UV
Sistemas rápidos de identificación:
Kit Bacticard Candida --> tarjeta con dos círculos rotulados (PRO y MUGAL) con 2 sustratos específicos para las enzimas, fluido rehidratante, 2 reactivos reveladores y una varilla aplicadora
3) Se incuba la tarjeta 5 minutos a Tª ambiente
4) Se añade una gota del revelador correspondiente en el círculo PRO, se deja 30 s y se observa si hay color rojo --> positivo a la enzima PRO
2) Se inocula una pequeña porción de la colonia aislada en cada círculo usando la varilla aplicadora
5) Se añade una gota del revelador correspondiente en el círculo MUGAL y se observa el color en oscuridad y con luz UV --> azul fluorescente brillante indica positivo a la enzima MUGAL
1) Se pone una gota de fluido rehidratante en cada uno de los 2 círculos
Si el resultado de ambos test es positivo, se trata de
Candida albicans
ya que es la única especie que presenta estas 2 enzimas
Pruebas para la identificación de
Cryptococcus
:
Cryptococcus neoformans
provoca infecciones pulmonares y meníngeas. Es una levadura con cápsula gruesa visible al microscopio con tinta china. Confirmación del diagnóstico mediante pruebas de ureasa, nitrato reductasa y fenol oxidasa
Identificación basada en métodos de asimilación de nutrientes: auxonograma:
permite determinar la capacidad de una levadura para asimilar diferentes nutrientes presentes en un medio de cultivo. Se utilizan diferentes medios de cultivo con distintos carbohidratos (fuentes de carbono) y productos nitrogenados (fuentes de nitrógeno)
Sistemas de identificación rápida:
existen varios en el mercado que permiten identificar en un único procedimiento a prácticamente cualquier levadura de interés clínico. Son galerías con medios de cultivo deshidratados específicos para cada prueba.
Procedimiento:
2) Incubación a la temperatura y durante el tiempo recomendados por el fabricante
3) Lectura de las galerías
1) Inoculación de la galería
Identificación de la levadura a nivel de especie comparando el perfil que da la galería con las claves suministradas por los fabricantes. se puede realizar de forma manual, semiautomática y automática.
Identificación mediante criterios inmunológicos
Se basan en detectar si en una muestra o colonia aislada está presente un determinado Ag característico de una especie. Las más usadas son aglutinación de partículas de látex y técnicas de ELISA
Aglutinación de partículas de látex:
mezclar sobre una superficie lisa una alícuota de la colonia sospechosa o de la muestra biológica con unas gotas de una suspensión de partículas de látex, someter a rotación y ver si hay aglutinación--> el Ag sospechoso está presente en la muestra
Técnica ELISA:
para el diagnóstico presuntivo rápido de candidiasis sistémica. Se detecta en el suero el Ag manano, componente de la pared celular de Candida
Identificación mediante criterios proteómicos
Usan la técnica MALDI-TOF, basada en generar el espectro de masa del microorganismo presente en la muestra y compararlo con los espectros de referencia almacenados en la biblioteca del sistema