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La identificación de levaduras - Coggle Diagram
La identificación de levaduras
Se puede llevar a cabo atendiendo diversos criterios: morfológicos, bioquímicos, inmunológicos y proteómicos.
Identificación mediante criterios morfológicos
Observación macroscópica
Se observa el aspecto de las colonias de levaduras al crecer en los diferentes medios de cultivo. En el cultivo en SDA las colonias suelen ser planas o ligeramente convexas, de consistencia cremosa y de olor dulzón y textura lisa o rugosa. De color blanquecino.
Observación microscópica
Visualización de hifas y esporas
La formación de pseudohifas o hifas verdaderas o de distintos tipos de esporas que podemos encontrar en levaduras es una característica morfológica que permitirá la identificación definitiva o presuntiva de algunas especies.
Prueba del tubo germinal o de filamentación precoz.
El tubo germinal es una extensión filamentosa de la levadura sin estrechamiento en su origen. Su anchura suele ser la mitad que tiene la célula progenitora y su longitud tres o cuatro veces mayor. Solamente Candida Albicans es capaz de producir tubos germinales.
Tinciones
Tinción de Gram, las levaduras grampositivas
Identificación mediante criterios biquímicos
Pruebas para la identificación de Candida
Es un género muy extendido y de gran interés. Provoca diversos tipos de micosis cutáneomucosas bastante frecuentes y además es responsable de muchas de las micosis sistémicas que pueden comprometer la vida de los pacientes.
Medios cromogénicos
Un sustrato cromogénico y un indicador enzimático hacen que una levadura sembrada en el medio forme colonias de un color u otro, dependiendo de cuál sea su actividad enzimática.
Medios fluorogénicos
Se basan en la incorporación de un componente en el medio que al ser hidrolizado por una enzima fúngica, produce un metabolismo fluorescente que se puede ver iluminado el medio con luz UV
Sistemas rápidos de identificación
Más habitual la BactiCard Candida, que proporciona en pocos minutos una identificación presuntiva de Candida Albicans.
El Kit consta de una tarjeta con dos círculos rotulados como PRO y MUGAL, fluido rehidratante, dos reactivos reveladores y una varilla aplicadora.
Su uso es muy sencillo:
1 Se toma la tarjeta y se pone una gota de fluido rehidratante en cada uno de los dos círculos.
2 Se inocula una pequeña porción de la colonia en cada círculo usando la varilla.
3 Se incuba la tarjeta durante 5 minutos a temperatura ambiente.
4 Se añade una gota de revelador en el PRO: si es color rojo es positivo a la enzima PRO.
5 Se añade una gota del revelador en el círculo MUGAL y se observa el color en la oscuridad con una lámpara de luz UV: si es color azul fluorescente brillante es positivo a la enzima MUGAL.
Si es positivo a los dos es Candida albicans
Pruebas para la identificación de Cryptococcus
Es un hongo que produce infecciones pulmonares y meníngeas. Se trata de una levadura que tiene una gruesa cápsula muy visible al microscopio mediante una tinción de tinta china.
Prueba de la ureasa, prueba de la nitrato reductasa y la prueba de la fenol oxidasa.
Identificación basada en métodos de asimilación de nutrientes: auxograma
Permite determinar la capacidad de una levadura para asimilar diferentes nutrientes presentes en un medio de cultivo. Para realizarla se utilizan medios de cultivo con diferentes carbohidratos y productos nitrogenados.
Sistema de identificación rápida
Permite identificar en un único procedimiento prácticamente cualquier levadura de interés clínico. Consisten en galerías con medios de cultivos deshidratadas específicos para cada prueba.
Procedimiento:
1 Inoculación de la galería
2 Incubación a la temperatura y durante el tiempo recomendado por el fabricante
3 Lectura de galerías
La identificación de la levadura a nivel de especie se consigue comparando el perfil obtenido en la galería con las claves suministradas por los fabricantes.
Se pueden utilizar de manera:
Manual
Semiautomática
Automática
Identificación mediante criterios inmunológicos
Se basan en detectar si en una muestra o en una colonia aislada está presente un determinado antígeno, característico de una especie patógena.
Las más utilizadas
Aglutinación de partículas de látex
Consiste en mezclar sobre una superficie lisa una alícuota de la colonia sospechosa o de la muestra biológica con unas gotas de una suspensión de partículas de látex. El conjunto se somete a rotación, si el antígeno sospechoso está presente en las muestra, las partículas de látex aglutinan.
Técnica ELISA
Para el diagnóstico presuntivo rápido de candidiasis sistémica es útil detectar en el suero de los pacientes el antígeno manano, un componente de la pared celular de Candida
Identificación mediante criterios proteómicos
La técnica es MALDI-TOF, se basa en generar el espectro de masas del microorganismo presente en una muestra y compararlo con los espectros de referencia almacenados en la biblioteca del sistema.