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LA IDENTIFICACIÓN DE LEVADURAS. - Coggle Diagram
LA IDENTIFICACIÓN DE LEVADURAS.
IDENTIFICACIÓN MEDIANTE CRITERIOS BIOQUÍMICOS.
PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN DE
CRIPTOCOCCUS.
Cryptococcus neoformans es un hongo que provoca infecciones pulmonares y meníngeas. Se trata de una levadura que tiene una gruesa cápsula, muy visible al microscopio mediante una tinción con tinta china.
La prueba de la ureasa, la prueba de la nitrato reductasa y la prueba de la fenol oxidasa.
IDENTIFICACIÓN BASADA EN MÉTODOS DE ASIMILACIÓN DE NUTRIENTES: AUXONOGRAMA.
Es una prueba microbiológica que permite determinar la capacidad de una levadura para asimilar diferentes nutrientes presentes en un medio de cultivo. Para realizarla se utilizan varios medios de cultivo con diferentes carbohidratos (fuentes de carbono) y productos nitrogenados (fuente de nitrógeno).
PRUEBAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE CANDIDA.
Candida es un género muy extendido y de gran interés. Provoca diversos tipos de micosis cutáneomucosas bastante frecuentes, y que además es responsable de muchas de las micosis sistémicas, que pueden comprometer la vida de pacientes inmunodeprimidos.
Los medios para la identificación de
Candida
.
MEDIOS FLUOROGÉNICOS.
Se basan en la incorporación de un componente en el medio que, al ser hidrolizado por una enzima fúngica, produce un metabolito fluorescente que se puede ver iluminando el medio con luz ultravioleta.
SISTEMAS RÁPIDOS DE IDENTIFICACIÓN.
Uno de los más habituales es la BactiCard Candida, que proporciona en pocos minutos una identificación presuntiva de
Candida albicans
.
Consta de una tarjeta con dos círculos rotulados como PRO y MUGAL (que son dos sustratos específicos para las enzimas), fluido rehidratante, dos reactivos reveladores y una varilla aplicadora.
Su uso es muy sencillo:
Se inocula la tarjeta durante cinco minutos a temperatura ambiente.
Se añade una gota del revelador correspondiente en el círculo PRO.
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Se inocuola una pequeña porción de la colonia aislada en cada círculo usando la varilla aplicadora.
Se añade una gota del revelador correspondiente en el círculo MUGAL y se observa el color del círculo en oscuridad con una lámpara de luz ultravioleta.
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Se toma la tarjeta y se pone una gota de fluido rehidratante en cada uno de los dos círculos.
Si el resultado de los dos test (PRO y MUGAL) es positivo, el hongo presente es
Candida albians
, ya que es la única especie que presenta estas dos enzimas.
MEDIOS CROMOGÉNICOS.
Un sustrato cromogénico y un indicador enzimático hacen que una levadura sembrada en el medio forme colonias de un color y otro, dependiendo de cuál sea su actividad enzimática.
SISTEMAS DE IDENTIFICACIÓN RÁPIDA.
En el mercado existen varios sistemas de identificación rápida y que permiten identificar en un único procedimiento prácticamente cualquier levadura de interés clínicos.
Consisten en galerías con medios de cultivo deshidratados específicos para cada prueba. El procedimiento consta de tres fases.
Incubación a la temperatura y durante el tiempo recomendados por el fabricante.
Lectura de las galerías.
Inoculación de la galería.
La identificación de la levadura a nivel de especie se consigue comparando el perfil obtenido en la galería con las claves suministradas por los fabricantes. Se pueden utilizar de manera:
SEMIAUTOMÁTICA.
AUTOMÁTICA.
MANUAL.
MIRAR
IDENTIFICACIÓN MEDIANTE CRITERIOS PROTÓMICOS.
La técnica MALDI-TOF, se basa en generar el espectro de masa del microorganismo presente en una muestra y compararlo con los espectros de referencia almacenados en la biblioteca del sistema.
IDENTIFICACIÓN MEDIANTE CRITERIOS INMUNOLÓGICOS.
Se basan en detectar si en una muestra o en una colonia aislada está presente un determinado antígeno, característico de una especie patógena. La más utilizada se basan en la aglutinación de partículas de látex y en técnicas de ELISA.
AGLUTINACIÓN DE PARTÍCULAS DE LÁTEX.
Consiste en mezclar sobre una superficie lisa una alícuota de la colonia sospechosa o de la muestra biológica con unas gotas de una suspensión de partículas de látex. Es conjunto se somete a rotación; si el antígeno sospechoso está presente en la muestra, las partículas de látex aglutinan.
TÉCNICA ELISA.
Para el diagnóstico presuntivo rápido de candidiasis sistémica es útil detectar en el suro de los pacientes el antígeno manano, un componente de la pared celular de
Cándida
.
IDENTIFICACIÓN MEDIANTE CRITERIOS MORFOLÓGICOS.
OBSERVACIÓN MACROSCÓPICA.
Se observa el aspecto de las colonias de levaduras al crecer en los diferentes medios de cultivo.
En un cultivo en SDA las colonias suelen ser planas o ligeramente convexas, de consistencia cremosa y olor dulzón y pueden tener textura lisa o rugosa. Lo más habitual es que sean de color blanquecino.
OBASERVACIÓN MICROSCÓPICA.
Hay diversas técnicas.
VISUALIZACIÓN DE HIFAS Y ESPORAS.
La formación de pseudohifas o hifas verdaderas, o de los distintos tipos de esporas que podemos encontrar en las levaduras, es una característica morfológica que permitirá la identificación definitiva o presuntiva de algunas especies de levaduras.
PRUEBA DEL TUBO GERMINAL O DE FILAMENTACIÓN PRECOZ.
Es una extensión filamentosa de la levadura, sin estrechamiento en su origen. Su anchura suele ser la mitad de la que tiene la célula progenitora, y su longitud, tres o cuatro veces mayor. Solamente
Candida albicans
es capaz de producir tubos germinales.
TINCIONES
La más habitual es la tinción de Gram, con la que las levaduras suelen comportarse como grampositivas y la tinción de azul de lactofenol.
Su identificación se puede llevar a cabo atendiendo a distintos criterios: morfológicos, bioquímicos, inmunológicos y proteómicos.