TINCIONES DIFERENCIALES
T. GRAM / IDENTIFICACIÓN BACTERIANA
FROTIS
CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS DE TINCIONES
FIJACIÓN
TINCIÓN GRAM
TEORIA DE LA COLORACIÓN
COLORANTES
MORDIENTE
SUBSTANCIA QUÍMICA CAPAZ DE REACCIONAR CON LOS ELEMENTOS CELULARES
FENÓMENO FÍSICO O QUÍMICO QUE PERMITE REACCIONAR AL COLORANTE CON LA ESTRUCTURA CELULAR
SUSTANTIVOS
BASICOS
ACIDOS
ADJETIVOS
De naturaleza coloidal, que tiñe directamente la estructura
Precisan de un mordiente para teñir
Ej. Sales férricas de Al
Ej. Ac. tánico
FÍSICA
QUÍMICA
La tinción se basa en procesos físicos de:, ADSORCIÓN, CAPILARIDAD y Osmosis
Se basa en reacciones moleculares, iónicas entre el colorante y la estructura celular.
C. BASICOS
CAOILARIDAD
ABSORCION
ABSORCION
OSMOSIS
C. ACIDOS
Se usa en Bacteriología (C de Hulla)
- FLAMEAR EL ASA BACTERIOLÓGICA (DISTAL A PROXIMAL) Y ENFRIAR EN AGUA DESTILADA.
- RECOGER Y DEPOSITAR 1 GOTA DE AGUA DESTILADA SOBRE EL PORTAOBJETO (HOMOGENIZAR LA MUESTRA SI ES SÓLIDA O SEMISÓLIDA
- IDENTIFICAR EL PORTAOBJETO (LÁPIZ GRASO, MARCADOR CD)
- TOMAR UN INÓCULO DE 1 COLONIA DE LA MUESTRA, SI ES LÍQUIDA AGITAR ANTES DE TOMAR LA MUESTRA.
- SECAR CON PAÑO
- EXTENDER LA MUESTRA EN FORMA CIRCULAR EN FORMA CENTRÍFUGA
- SUMERGIR EN ALCOHOL
- FLAMEAR EL ASA BACTERIOLÓGICA (DE PROXIMAL A DISTAL)
- SECAR CON PAÑO SIN HILACHAS
- FIJAR AL CALOR DE LA LLAMA DEL MECHERO.
- LAVAR EL PORTAOBJETO
5 Min
- Procedimiento de muerte celular.
- Adhesión firme al portaobjeto
FÍSICO
QUÍMICA
T. NEGATIVA O INDIRECTA
MÉTODO DE BURRI
T. SIMPLE
Se usa 1 solo colorante. Ej. Azul de Metileno. Observa: Fondo claro, bacterias azules o celestes
Observa: Bacterias claros y relucientes sobre fondo plomizo. Ej. Capsulas (Tinta China o Nigrosina), no fijar a la llama del mechero.
El colorante ácido no reacción con la bacteria, se extiende similar al frotis de sangre. Brinda imagen de contraste a la bacteria.
T. ESPECIALES
TINCIÓN GRAM - FUNDAMENTO
T. DIFERENCIALES
T. ESTRUCTURAL
TINCION FLAGELOS
Reacciona el colorante con la estructura bacteriana. Podemos teñir: Flagelos, Esporas, Gránulos de Volutina.
MÉTODO DE NEISSER
MÉTODO DE NEGRO SUDAN
MÉTODO DE HIS
MÉTODO DE SCHAEFFER - FULTON
MÉTODO DE LEIFSON (FLAGELOS)
EL USO DEL COLORANTE Y MORDIENTE HACE QUE SE VEAN LAS BACTERIAS MAS VOLUMINOSAS. Se prepara suspensión de bacterias flageladas, lavando la superficie del tubo de ensayo en pico de flauta. No fijar, secar al aire libre, aplicar colorante Leifson x 10 min, lavar, secar, observar.
Permite observar las capsulas.
Permite observar CORPUSCULOS METACROMÁTICOS (VOLUTINA).
Permite observar VACUOLAS de GRASA.
Permite observar las ESPORAS.
los flagelos deben ser recubiertos con suficiente colorante como para ser observado
se aplica mordiente para aumentar el grosor de los flagelos y se tiñen con pararosanilina o fucsina
MÉTODO DE FONTANA
Tinción del Treponema pallidum, se usa impregnación argentica
- Aplicar colorante de Fontana
- Aplicar colorante de Fontana
- Lavar
- Reposar hasta que tome color castaño
- Calentar hasta que desprenda valor
- Lavar
- Aplicar sol. De ác. Tánico (5%) y Fenol (1%)
- Secar con papel filtro
- Frotis
10.Observar
Se usa 2 colorantes uno 1rio y 2 rio, permite Diferenciar a microorganismos entre sí, de acuerdo a su afinidad tintorial y en función a características estructurales
TINCIÓN GRAM
TINCIÓN ZIEHL NELSEN
la tincion de gram o coloracion de gram tincion diferencial es una tecnica muy sencilla que se basa en el uso de un colorante empleado en bacteriología para la visualizacion de bacterias.
Diferencia estructural de la pared bacteriana Diferencia de permeabilidad a través de los poros
GRAM POSITIVO
GRAM NEGATIVO
PEPTIDOGLUCAN
- Membrana externa
- Permitiendo extracción del complejo Violeta-Lugol por acción del acohol o acetona. No retiene el color Violeta.
- Lipoproteínas.
- Poros amplios de la pared bacteriana aún en contacto con el alcohol o acetona.
- Lipopolisacáridos.
- Se tiñe con el 2do colorante Fucsina Básica.
- Contiene poco Peptidoglucanos.
- Mg+
- Disminución del diámetro de los poros del peptidoglucano.
- Ac. Teicoicos
- Ac. Murámico
- Capacidad de teñirse con Violeta de Genciana o Cristal Violeta.
PROCEDIMIENTO
1.- FROTIS
2.- FIJARLAS A LAS LLAMAS DEL MECHERO
3.- AGREGAR 1er COLORANTE 2a3 gotas violeta de genciana por 1 a 3 minutos
4.- ENJUAGAR CON AGUA NO DIRECTAMENTE SOBRE LA MUESTRA
5.- AGREGAR 2 GOTAS DE LUGOL POR 30 SE. A 1 MINUTO APROXIMADAMENTE
6.- LAVAR CON AGUA DESTILADA
7.- AGREGAR 1a 2 GOTAS DE ALCOHOL ACETONA POR 30 SE. A 1 MIN.
8.- ENJUAGAR CON AGUA
9.- TINCION DE CONTRASTE 2 DO COLORANTE Y APLICAR 2 GOTAS DE SAFRANINA O FUCSINA BASICA POR 1 A 3 MINUTOS
10.- LAVAR CON AGUA
11.- ESCURRIR
12.- OBSERVAR AL MICROSCOPIO
BEYMAR EDDY ROJAS CHAMBI
GRUPO3