TINCIONES DIFERENCIALES
T. GRAM / IDENTIFICACIÓN BACTERIANA

FROTIS

CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS DE TINCIONES

FIJACIÓN

TINCIÓN GRAM

TEORIA DE LA COLORACIÓN

COLORANTES

MORDIENTE

SUBSTANCIA QUÍMICA CAPAZ DE REACCIONAR CON LOS ELEMENTOS CELULARES

FENÓMENO FÍSICO O QUÍMICO QUE PERMITE REACCIONAR AL COLORANTE CON LA ESTRUCTURA CELULAR

SUSTANTIVOS

BASICOS

ACIDOS

ADJETIVOS

De naturaleza coloidal, que tiñe directamente la estructura

Precisan de un mordiente para teñir

Ej. Sales férricas de Al

Ej. Ac. tánico

FÍSICA

QUÍMICA

La tinción se basa en procesos físicos de:, ADSORCIÓN, CAPILARIDAD y Osmosis

Se basa en reacciones moleculares, iónicas entre el colorante y la estructura celular.

C. BASICOS

CAOILARIDAD

ABSORCION

ABSORCION

OSMOSIS

C. ACIDOS

Se usa en Bacteriología (C de Hulla)

  1. FLAMEAR EL ASA BACTERIOLÓGICA (DISTAL A PROXIMAL) Y ENFRIAR EN AGUA DESTILADA.
  1. RECOGER Y DEPOSITAR 1 GOTA DE AGUA DESTILADA SOBRE EL PORTAOBJETO (HOMOGENIZAR LA MUESTRA SI ES SÓLIDA O SEMISÓLIDA
  1. IDENTIFICAR EL PORTAOBJETO (LÁPIZ GRASO, MARCADOR CD)
  1. TOMAR UN INÓCULO DE 1 COLONIA DE LA MUESTRA, SI ES LÍQUIDA AGITAR ANTES DE TOMAR LA MUESTRA.
  1. SECAR CON PAÑO
  1. EXTENDER LA MUESTRA EN FORMA CIRCULAR EN FORMA CENTRÍFUGA
  1. SUMERGIR EN ALCOHOL
  1. FLAMEAR EL ASA BACTERIOLÓGICA (DE PROXIMAL A DISTAL)
  1. SECAR CON PAÑO SIN HILACHAS
  1. FIJAR AL CALOR DE LA LLAMA DEL MECHERO.
  1. LAVAR EL PORTAOBJETO

5 Min

  1. Procedimiento de muerte celular.
  2. Adhesión firme al portaobjeto

FÍSICO

QUÍMICA

T. NEGATIVA O INDIRECTA

MÉTODO DE BURRI

T. SIMPLE

Se usa 1 solo colorante. Ej. Azul de Metileno. Observa: Fondo claro, bacterias azules o celestes

Observa: Bacterias claros y relucientes sobre fondo plomizo. Ej. Capsulas (Tinta China o Nigrosina), no fijar a la llama del mechero.

El colorante ácido no reacción con la bacteria, se extiende similar al frotis de sangre. Brinda imagen de contraste a la bacteria.

T. ESPECIALES

TINCIÓN GRAM - FUNDAMENTO

T. DIFERENCIALES

T. ESTRUCTURAL

TINCION FLAGELOS

Reacciona el colorante con la estructura bacteriana. Podemos teñir: Flagelos, Esporas, Gránulos de Volutina.

MÉTODO DE NEISSER

MÉTODO DE NEGRO SUDAN

MÉTODO DE HIS

MÉTODO DE SCHAEFFER - FULTON

MÉTODO DE LEIFSON (FLAGELOS)

EL USO DEL COLORANTE Y MORDIENTE HACE QUE SE VEAN LAS BACTERIAS MAS VOLUMINOSAS. Se prepara suspensión de bacterias flageladas, lavando la superficie del tubo de ensayo en pico de flauta. No fijar, secar al aire libre, aplicar colorante Leifson x 10 min, lavar, secar, observar.

Permite observar las capsulas.

Permite observar CORPUSCULOS METACROMÁTICOS (VOLUTINA).

Permite observar VACUOLAS de GRASA.

Permite observar las ESPORAS.

los flagelos deben ser recubiertos con suficiente colorante como para ser observado

se aplica mordiente para aumentar el grosor de los flagelos y se tiñen con pararosanilina o fucsina

MÉTODO DE FONTANA

Tinción del Treponema pallidum, se usa impregnación argentica

  1. Aplicar colorante de Fontana
  1. Aplicar colorante de Fontana
  1. Lavar
  1. Reposar hasta que tome color castaño
  1. Calentar hasta que desprenda valor
  1. Lavar
  1. Aplicar sol. De ác. Tánico (5%) y Fenol (1%)
  1. Secar con papel filtro
  1. Frotis

10.Observar

Se usa 2 colorantes uno 1rio y 2 rio, permite Diferenciar a microorganismos entre sí, de acuerdo a su afinidad tintorial y en función a características estructurales

TINCIÓN GRAM

TINCIÓN ZIEHL NELSEN

la tincion de gram o coloracion de gram tincion diferencial es una tecnica muy sencilla que se basa en el uso de un colorante empleado en bacteriología para la visualizacion de bacterias.

Diferencia estructural de la pared bacteriana Diferencia de permeabilidad a través de los poros

GRAM POSITIVO

GRAM NEGATIVO

PEPTIDOGLUCAN

  1. Membrana externa
  1. Permitiendo extracción del complejo Violeta-Lugol por acción del acohol o acetona. No retiene el color Violeta.
  1. Lipoproteínas.
  1. Poros amplios de la pared bacteriana aún en contacto con el alcohol o acetona.
  1. Lipopolisacáridos.
  1. Se tiñe con el 2do colorante Fucsina Básica.
  1. Contiene poco Peptidoglucanos.
  1. Mg+
  1. Disminución del diámetro de los poros del peptidoglucano.
  1. Ac. Teicoicos
  1. Ac. Murámico
  1. Capacidad de teñirse con Violeta de Genciana o Cristal Violeta.

PROCEDIMIENTO

1.- FROTIS

2.- FIJARLAS A LAS LLAMAS DEL MECHERO

3.- AGREGAR 1er COLORANTE 2a3 gotas violeta de genciana por 1 a 3 minutos

4.- ENJUAGAR CON AGUA NO DIRECTAMENTE SOBRE LA MUESTRA

5.- AGREGAR 2 GOTAS DE LUGOL POR 30 SE. A 1 MINUTO APROXIMADAMENTE

6.- LAVAR CON AGUA DESTILADA

7.- AGREGAR 1a 2 GOTAS DE ALCOHOL ACETONA POR 30 SE. A 1 MIN.

8.- ENJUAGAR CON AGUA

9.- TINCION DE CONTRASTE 2 DO COLORANTE Y APLICAR 2 GOTAS DE SAFRANINA O FUCSINA BASICA POR 1 A 3 MINUTOS

10.- LAVAR CON AGUA

11.- ESCURRIR

12.- OBSERVAR AL MICROSCOPIO

BEYMAR EDDY ROJAS CHAMBI
GRUPO3