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METODOS DE TINCIONES DIFERENCIALES T.GRAM-IDENTIFICACION BACTERIANA -…
METODOS DE TINCIONES DIFERENCIALES
T.GRAM-IDENTIFICACION BACTERIANA
Tincion Gram
COLORANTES
SUBSTANCIA QUÍMICA CAPAZ DE REACCIONAR CON LOS ELEMENTOS CELULARES
SUSTANTIVOS: DE NATURALEZA COLOIDAL
ADJETIVOS: PRECISAN DE UN MORDIENTE PARA TEÑIR
MORDIENTE
FENOMENO FISICO QUE PERMITE REACCIONAR AL COLORANTE CON LA ESTRUCTURA CELULAR
BASICO: SALES FERRICA DE AI
ACIDO: ACIDO TÁNICO
TEORIA DE COLORACION
FISICA
LA TINCION SE BASA EN PROCESOS DE: ABSORCION,ADSORSION, CAPILARIDAD, OSMOSIS
QUIMICA
SE BASA EN LAS REACIONES MOLECULARES IONICAS ENTRE UN COLORANTE Y ESTRUCTIRA CELULAR
FROTIS
PASOS:
1.LAVAR EL
PORTAOBJETOS
2.SECAR CON UN PAÑO SIN HILACHAS
SUMERGIR EN ALCOHOL
SECAR CON PAÑO
IDENTIFICAR EL PORTAOBJETO (LÁPIZ GRASO, MARCADOR CD)
FLAMEAR EL ASA BACTERIOLÓGICA (DISTAL A PROXIMAL) Y ENFRIAR
EN AGUA DESTILADA.
7.RECOGER Y DEPOSITAR 1 GOTA DE AGUA DESTILADA SOBRE EL PORTAOBJETOS (HOMOGENIZAR LA MUESTRA SI ES SOLIDA O SEMISOLIDA)
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CLASIFICACION DE LOS METODOS DE TINCION
TINCION SIMPLE
SE USA UN SOLOCOLORANTE, EJ. AZUL DE METILENO, SE OBSERVA FONDO CLARO, BACTERIAS AZULES O CELESTES
TINCION NEGATIVA O INDIRECTA
SE OBSERVA BACTERIAS CLARAS Y RELUCIENTES, SOBRE FONDO PLOMIZO, EJ. CAPSULA, (TINTA CHINA O NIGROSINA)
METODO DE BURRI: EL COLORANTE ACIDO NO REACCIONA CON LA BACTERIA, SE OBSERVA UNA IMAGEN DE CONTRASTE DE LA BACTERIA
: REACCIONA EL COLORANTE CON LA ESTRUCTURA BACTERIANA, SE PUEDE TEÑIR ESPORAS, FLAGELOS.
METODO DE DE LEIFSON (FLAGELOS)
T. ESTRUCTURAL
MÉTODO DE HIS: Permite observar las
capsulas.
MÉTODO DE SCHAEFFER - FULTON: Permite
observar las ESPORAS.
MÉTODO DE NEISSER: PERMITE OBSERVAR CORPUSCULOS METACROMATICOS
MÉTODO DE NEGRO SUDAN: Permite
observar VACUOLAS de GRASA.
T. ESPECIALES
METODO DE FONTANA: TINCION TREPONEMA PALLIDUM, SE USA IMPREGNACION ARGENICA
FROTIS
4.APLICAR SOL. DE ACIDO TANICO(5%) Y FENOL(1&)
CALENTAR HASTA QUE DESPRENDA VALOR
LAVAR
APLICAR COLORANTE DE FONTANA
6.CALENTAR HASTA EVAPORIZACION
REPOSAR HASTA QUE TOME COLOR CASTAÑO
8.LAVAR
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T. DIFERENCIALES
SE USA 2 COLORANTES PRIAMRIO Y SECUNDARIO, PERMITE DIFERENCIAR MICROORGANISMOS ENTRE SI.
TINCION GRAM
SU NOMBRE SE DEBE AL BACTERIOLOGO CHRISTIAN GRAM QUE DESARROLLO LA TECNICA EN 1884
PERMITE VER LA DIFERENCIA ESTRUCTURAL DE LA PARED BACTERIANA
GRAM POSITIVO
PIGEMENTO VIOLACEO
GRAM NEGATIVO
PIGMENTO COMO LA FUCSINA BASICA (ROSA)
PROCEDIMIENTO
FROTIS(MUESTRA)
2.FIJARLA A LA LLAMA DEL MECHERO
3.AGREGAR EL PRIMER COLORANTE, DOS GOTAS DE VIOLETA DE GENCIANA POR 1 A 3 MIN.
4.ENJUAGAR SOBRE AGUA, NO DIRECTO SOBRE LA MUESTRA.
AGREGAR DOS GOTAS LUGOL POR 30 SEG, A 1 MIN
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TINCIÓN ZIEHL NELSEN