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TINCIONES DIFERENCIALES - TINCIÓN GRAM, Univ. Yawuar Nelson Quispe Mamani …
TINCIONES DIFERENCIALES - TINCIÓN GRAM
Tinción Gram
Colorantes
Reacciona a elementos celulares
sustantivos
Tiñe directamente la estructura
Adjetivos
necesita mordiente para teñir
Mordiente
Fenomeno fisico o quimico
Permite reaccionar al colorante con la estructura celular
Acidos
Acido tánico
Basicos
Sales ferricas de Al
Teoria de la coloración
Química
Reacciones moleculares, iónicas entre colorante y la estructura
Física
Capilaridad
Osmosis
Absorción
Clasificación de los métodos de tinciones
Tinción Simple
1 solo colorante Ej. Azul de metileno
Tinción negativa o indirecta
Observa bacterias mas claras y relucientes sobre el fondo plomizo
Tinta china o negrosina
Método de Burri
Colorante acido no reacciona con la bacteria
Frotis
Pasos
Secar con paño sin hilachas
Sumergir en el alcohol
Recoger y depositar 1 gota de agua destilada sobre el porta objeto
Secar con un paño
Identificar
Flamear en el asa bacteriologica
Fijar al calor de la llama del mechero
Extender la muestra en forma circular
Flamear el asa bacteriologica
Tomar un inoculo de 1 colonia de a muestra
Fijación 5min
Procedimiento de muerte celular
Adhesion firme al portaobjeto
Tinción estructural
Método de Leifson
Bacterias mas voluminosas
Se prepara la suspensión de bacterias flageladas, lavar la superficie del tubo de ensayo en pico de flauta
No fijar, secar al aire libre, aplicar X 10 min el colorante Leifson, lavar, secar y observar
Método de His
Permite observar capsulas
Método de Neisser
Observa Corpusculos metacromáticos (Volutina)
Método de Schaeffer - Fulton
Permite observar esporas
Método de Negro Sudan
Observa Vacuolas de grasa
Tinciones Especiales
Método de Fontana
Para la impregnación argentica
1.Frotis
2.Aplicar sol. De ác. Tánico (5%) y Fenol (1%)
3.Calentar hasta que desprenda valor
4.Lavar
5.Aplicar colorante de Fontana
6.Calentar hasta evaporización
7.Reposar hasta que tome color castaño
8.Lavar
9.Secar con papel filtro
10.Observar
Treponemas
Tinciones de plata (Argenticas)
Inmunofluorescencia directa
PCR
Determinacion de fragmentos especificos del genoma de los treponema
Tinciones Diiferenciales
Permite diferenciar a microorganismos entre si
Tinción Gram
Usa un solo colorante, para la visualizacion
Se debe al bacteriologo Danés Christian Gram
Diferencia estructural de la pared bacteriana, diferencia de permeabilidad a traves de poros
Gram positivo
Peptidoglucano
Ac. Murámico
Ac. Teicoicos
Mg+
.Disminución del diámetro de los poros del peptidoglucano.
Capacidad de teñirse con Violeta de Genciana o Cristal Violeta.
Gram negativo
Pocos peptidoglucanos
Lipopolisacáridos
.Lipoproteínas
Membrana externa
Permitiendo extracción del complejo Violeta-Lugolpor acción del acohol o acetona. No retiene el color Violeta
Poros amplios de la pared bacteriana aún en contacto con el alcohol o acetona
Procedimiento
Agregar 1 a 2 gotas de Alcohol acetona por 30 seg a 1 min
Gram negativo si se decoloran
Gram positivo si no se decolora
Enjuagar con agua
Lavar con agua destilada
Tinción de contraste, 2do colorante, aplicar 2 gotas de safranina o fuscina por 1 a 3 min
Agregar 2 gotas de Lugol por 30 seg a 1 min.
Lavar con agua
Enjuagar con agua, no directamente sobvre la muestra
Escurrir
Agregar el 1er Colorante, de 2 a 3 gotas de violeta de genciana por 1 a 3 min
Observar al microscopio
Fijarlas a las llamas del mechero
Frotis
Univ. Yawuar Nelson Quispe Mamani
