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Diversidad de levaduras asociadas a chichas tradicionales de Colombia,…
Diversidad de levaduras asociadas a chichas tradicionales de Colombia
Las fermentaciones espontáneas a partir de diversos sustratos
se aislaron e identificaron las levaduras asociadas a las chichas de maíz, piña y arracacha
durante sus tres fases de fermentación: inicial, tumultuosa y final
para obtener la bebida
se utilizan diferentes sustratos, tales como el maíz (Zea mays), piña (Ananas comosus), arracacha (Arracacia xanthorhriza), chontaduro (Bactris gasipaes), maní (Arachis hypogaea) y trigo (Triticum sativum)
Inicialmente
caracterización parcial de los aislados, se realizó con pruebas fisiológicas, y medición de su capacidad para producir filamentos y esporas
pero
no fueron suficientes para identificar los aislados hasta el nivel taxonómico de género o de especie
El estudio se complemento con
el estudio de cada aislado empleando técnicas moleculares basadas en el análisis de restricción del gen rRNA 5.8S y los espaciadores transcritos internos (ITS1 e ITS2)
para su complementación definitiva
Se usó el PCR-RFLPs, que secuenció el dominio D1/D2 del gen 26S rRNA de los aislados más representativos.
Al inicio del proceso es posible detectar la mayor diversidad de levaduras, y a medida que el proceso avanza a las fases intermedia y final aparecen levaduras que se caracterizan principalmente por su alcohol-resistencia y alto poder fermentativo como la especie Saccharomyces cerevisiae.
PROCESOS MICROBIOLÓGICOS
Aislamiento de levaduras
A partir de cada muestra
diluciones seriadas (10-1-10-5) y de cada dilución se tomaron 100µl para la siembra por dispersión en medio de cultivo YPDA (1% extracto de levadura, 2% peptona, 2% de glucosa, 2% agar-agar) suplementado con 25mg/l de penicilina y cloramfenicol.
incubación a 30oC durante 2 a 3 días
Un número aleatorio de cada tipo de colonia fue aislado para su posterior identificación
cuantificación mediante espectrofotometría a 260nm y determinación de la pureza mediante la relación espectrofotométrica A260/A280nm.
PROCESOS MOLECULARES
Extracción y cuantificación de ADN
La identificación de los aislados
PCR-RFLP de la región ITS1-5.8S rDNA-ITS2
Para la amplificación, los primers usados fueron ITS1 e ITS4.
Los productos de PCR fueron digeridos con 1U de las endonucleasas Hae III, Hinf I y Cfo I (Fermentas, USA) a 37oC por 2h.
Las reacciones fueron llevadas a cabo en un termociclador automático
Los tamaños de los fragmentos fueron estimados por comparación con un marcador de peso molecular 50-1000pb (Fermentas, USA), usando el software UVIgelStartMw v11.0©
Secuenciación del Dominio D1/D2 del gen ribosomal 26S
grupos principales de los aislados
se usaron los primers NL1 y NL4
Las reacciones fueron llevados a cabo en un termociclador
Los productos de PCR fueron purificados y secuenciados por la empresa MACROGEN (USA) bajo las condiciones estandarizadas
las secuencias fueron ensambladas mediante el software Chromas Pro v. 1.42 ® y comparadas con las secuencias reportadas en el GenBank usando el algoritmo "Basic Local Alignment Search Tool (BLAST)".
PROCESOS BIOQUÍMICOS
Caracterización fenotípica
los aislados se analizaron
según criterios morfológicos y fisiológicos
Se evaluó la morfología celular, modo de reproducción vegetativa y caracterización fisiológica
La habilidad para fermentar (2% de fuente de carbono) y asimilar (0.5% de fuente de carbono) glucosa, maltosa, sacarosa, galactosa y xilosa fue evaluada por la acumulación de dióxido de carbono
Evaluacion de
halo-tolerancia (10, 15% p/v) y tolerancia a etanol (10 y 15% v/v) en medio YPDA
RESULTADO
Las especies que presentaron mayor abundancia en las tres chichas fueron Saccharomyces cerevisiae (15%), Pichia guilliermondii (18%) y Candida tropicalis (18%)
Los procesos Microbiológico, Moleculares y Bioquímicos se complementan en estudios como el que se describió, ya qué es indispensable aplicar técnicas de aislamiento de microorganismos, así como identificación por sus funciones frente a el alimento que sintetizan y por su puesto, el análisis a fondo de su ADN para su caracerización.
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Las propiedades de las bebidas fermentadas tradicionales son el resultado combinado de la actividad metabólica sinérgica de grupos microbianos o cepas únicas, junto con las características del proceso de producción.
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actividad metabólica sinérgica de grupos microbianos o cepas únicas
NOMBRE: LISETTE ARIAS
NRC: 6931
DOCENTE: Msc. ALMA KOCH
CÁTEDRA DE MICROBIOLOGÍA