Apenas um espermatozoide pode penetrar no óvulo, pois, alguns minutos após o esperma ter penetrado na zona pelúcida do óvulo, os íons cálcio se difundem na membrana do oócito e provocam a liberação, por exocitose, de vários grânulos corticais do oócito para o espaço perivitelínico. Então, esses grânulos contém substâncias que permeiam todas as regiões da zona pelúcida, e impedem a ligação de espermatozoide adicional, fazendo com que qualquer esperma adicional se solte.