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Advances in aptamers-based lateral flow assays - Coggle Diagram
Advances in aptamers-based lateral flow assays
Aptâmeros
ácidos nucleicos que podem se ligar a uma ampla variedade de alvos diversos
oferecem várias vantagens sobre suas contrapartes de anticorpos
flexibilidade para se adaptar a diferentes formatos de ensaio
podem ser sintetizados com alta reprodutibilidade e pureza e são quimicamente estáveis
podem ser selecionados contra regiões específicas dos alvos
LFA
ensaios de fluxo lateral (LFA) são uma plataforma em papel para a detecção de alvos
devido aos baixos custos de desenvolvimento e facilidade de produção, estão bem estabelecidos para aplicações em pontos de necessidade e têm sido amplamente utilizados em diversos campos, incluindo biomedicina, controle de qualidade, segurança de alimentos e saúde ambiental
Vários formatos de ensaios de fluxo lateral foram relatados explorando aptâmeros como agente de bioafinidade
competitivos
preferido para alvos de baixo peso molecular ou alvos com um único epítopo específico, embora também possa ser usado para moléculas maiores e é particularmente útil para alvos contra os quais existe apenas um aptâmero
o analito alvo compete com o mesmo alvo imobilizado na linha de teste pela ligação à molécula repórter rotulada
sanduíche
é o ensaio preferido para moléculas maiores ou quando existem vários epítopos no alvo e quando existem dois aptâmeros para o alvo
Uma molécula repórter rotulada reage com o analito de interesse e esse complexo é capturado na linha de teste por uma molécula de captura imobilizada. O excesso de moléculas repórter rotuladas não ligadas é então capturado na linha de controle
Ensaio de fluxo lateral de aptâmero em sanduíche
usando par de aptâmeros
uso dos conhecidos aptâmeros duplos de trombina , TBA1 e TBA2
O aptâmero TBA1 tiolado com um ligante 20-T foi quimiolorvido em nanopartículas de ouro e utilizado como repórter rotulado aptâmero
O teste e a linha de controle foram funcionalizados com estreptavidina e o Tamer2 biotinilado, o aptâmero foi imobilizado na linha de teste e um oligômero 20-A biotinilado
fluxo lateral usando um par de aptâmeros para a detecção de células cancerígenas
a linha de controle consistia em um oligonucleotídeo complementar a uma parte do aptâmero marcado com AuNP
usando uma combinação de anticorpos e aptâmeros
detecção de α-amilase salivar (sAA)
o aptâmero AMYm1 foi modificado com biotina e vinculado a estreptavidina-AuNPs (aptâmero-biotina-SA-AuNP)
na linha de teste, o anticorpo anti-sAA foi imobilizado e a proteína sAA foi imobilizada na linha de controle
na presença de sAA, o complexo entre o alvo e o aptâmero-biotina-SA-AuNP foi capturado pelo anticorpo imobilizado na linha de teste e o excesso de bioconjugado foi capturado na linha de controle, resultando em duas faixas vermelhas
aptâmero sanduíche usando o aptâmero
estratégia consiste em duas sondas de DNA que se reúnem apenas na presença do ATP alvo
Um aptâmero dividido tiolado foi absorvido quimicamente em AuNPs e o outro aptâmero dividido foi biotinilado e imobilizado na membrana de nitrocelulose por interações estreptavidina-biotina
A sonda de DNA complementar ao aptâmero parte 1 - bioconjugado AuNP foi imobilizada na linha de controle
Ensaio competitivo de aptâmero de fluxo lateral
Duas abordagens
baseada na competição entre o analito alvo na solução a ser testada e o mesmo analito alvo imobilizado na linha de teste
em que o DNA parcialmente complementar ao conjugado aptâmero-AuNP é imobilizado no a linha de teste e compete com o analito alvo para se ligar às nanopartículas de ouro rotuladas como aptâmero
ambos os casos, a amostra contendo o analito alvo é aplicada à almofada de amostra e liga-se ao aptâmero marcado adsorvido na almofada conjugada
Observações finais
O uso de aptâmeros em ensaios de fluxo lateral tem um grande potencial, com aptâmeros possuindo várias propriedades vantajosas em comparação com suas contrapartes de anticorpos
são selecionados usando um método in vitroprocesso
a seleção de aptâmeros também pode ser realizada em condições não fisiológicas semelhantes às condições nas quais o aptâmero será aplicado
o custo de produção por síntese química é significativamente menor que o custo de um anticorpo monoclonal ou mesmo policlonal
são altamente estáveis, mesmo de forma imobilizada, por longos períodos de tempo armazenados à temperatura ambiente, e isso é de importância significativa para os LFAs, pois essa propriedade facilita o armazenamento do LFA em condições não refrigeradas
podem ser facilmente modificados ou imobilizados, sem afetar sua afinidade, e devido à sua natureza inerente