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Prueba de vitamina B12 - Coggle Diagram
Prueba de vitamina B12
La Vitamina B-12 es una de las nueve vitaminas hidrosolubles
importantes para el buen funcionamiento corporal
El rol más importante de la vitamina B12 en el cuerpo es la formación de las células rojas y la formación de las vainas de mielina alrededor de los nervios.
El consumo de la vitamina B12 comienza por ingestión y luego por digestión por medio de la saliva. Una vez llega al intestino,la vitamina B12 se une a las proteínas en la comida y son liberadas por los ácidos presentes.
Reactivos
Son los siguientes
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Reactivo Trazador Vitamina B-12 - 6,0 ml / vial
Reactivo Vitamina B-12 Biotina - 6,0 ml
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Materiales
Son los siguientes
Pipeta de 50μl, y 100μl con una precisión mayor a 1,5%.
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Dispensador(es) de 0.100ml y 0.350ml con una precisión mayor a 1,5%.
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Tubos de prueba de vidrio para sueros de referencia, controles y muestras de pacientes a prepararse.
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Procedimiento de prueba
Pasos
- Marcar los pozos de microplaca para cada suero de referencia, control y muestra a analizar por duplicado.
- Pipetear 0.050 ml (50μL) de calibrador de vitamina B12 extraído apropiadamente, control o muestra dentro del pozo asignado.
- Adicionar 0,050 ml (50μl) de Reactivo de Vitamina B-12 Biotina a todos los pozos
- Agitar suavemente la microplaca durante 20-30 segundos para mezclar.
- Cubrir e incubar durante 45 minutos a temperatura ambiente.
- Adicionar 0.050 ml (50μL) de Reactivo Trazador de Vitamina B-12 a todos los pozos.
- Agitar suavemente la microplaca durante 20-30 segundos para mezclar.
- Cubrir e incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente.
- Desechar el contenido de la microplaca mediante decantación o aspiración. Si se realiza decantación, secar la placa con papel absorbente.
- Adicionar 350μl de Búfer de lavado (ver sección de Preparación de Reactivos), decantar (golpear y secar) o aspirar. Repetir dos (2) veces más para un total de cinco (5) lavados.
- Adicionar 0,100 ml (100μl) de la Reactivo de Sustrato a todos los pozos. NO AGITAR LA PLACA DESPUÉS DE ADICIONAR EL SUSTRATO
- Incubar a temperatura ambiente durante cinco (5) minutos.
- Leer las unidades de luz relativa (ULRs) en cada pozo durante 0.2 – 1.0 segundos.
Cálculos y resultados
- Registrar las unidades de luz relativa obtenidas a partir de la impresión del lector de microplaca.
- Graficar la absorbancia para cada suero referencia duplicado frente a la correspondiente concentración de Vitamina B12 en pg/ml en papel gráfico lineal (no promediar los duplicados de los sueros de referencia antes de graficarlos).
- Trazar la mejor curva a través de los puntos.
- Para determinar la concentración de Vitamina B-12 de una muestra desconocida, ubicar la absorbancia promedio de los duplicados para cada muestra desconocida.
