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Ideonella sakaiensis, Objetivo, Siembra de la bacteria, Esterilización,…
Ideonella sakaiensis
Bacteria que gracias a dos enzimas pertenecientes a ella pueden degradar el PET
Cultivar y mediante tinciones y pruebas bioquímicas, clasificar a
Ideonella sakaiensis
para que pueda ser utilizada en la degradación de plásticos, ya que éstos representan un gran problema a nivel ambiental
Esterilización de material de vidrio (tubos de ensaye, matraces y medios de cultivo) por medio de método de calor húmedo: En autoclave a 15 lb por 15 minutos
Las pipetas graduadas serán esterilizadas en el horno eléctrico a 180°C por 1 h
En tubos de ensaye etiquetados 10^-1...10^-6 se realizarán diluciones
Caracterización morfológica de la bacteria, describiéndola por: tamaño, color, forma, elevación, superficie, aspecto, bordes, luz reflejada y luz transmitida
Agar nutritivo y tomando una alícuota de 1 mL
Realizando un frotis y colocando colorante: azul de metileno o safranina
Dejar actuar 1 minutos, quitar exceso y observar a microscopio en inmersión.
Utilizada para observar su agrupación
Realizar un frotis, cubrir con cristal violeta y lugos, dejando actuar por 1 minuto
Posteriormente lavar y colocar alcohol acetona por 5 segundos, lavar y colocar safranina por 1 min
Lavar y observar al microscopio en inmersión
Utilizada para observar cantidad de peptidoglicano en la pared celular de la bacteria
Bacilos gram negativos.
Frotis y fijarlo con formol. Posteriormente adicionar colorante de Leifson y teñir 10 minutos. Lavar exceso y observar en inmersión al microscopio. Utilizada para observar si presenta movilidad por medio de flagelos o no
Colocar 1 gota de peróxido de hidrógeno al 3% y una muestra del cultivo (da prueba positiva, formación de burbujas; por lo tanto descompone el peróxido en hidrógeno y oxígeno)
Colocar una muestra de la cepa en una tira con reactivo para oxidasa. (resultado positivo, coloración morada)
Tomar una muestra de la cepa y hacer la técnica de siembra por picadura (3 mm antes del fondo del tubo), incubarf a 37°C por 24 h. Prueba positiva, la bacteria presenta movilidad
Sembrar por la técnica de asa suspendida la cepa en el medio glucosa base rojo fenol
Incubar a 37°C de 24 a 48 h
Prueba positiva
Incubar en un medio nutritivo, con un tapón que permita la entrada de oxígeno de forma regulada, observar crecimiento en aerobiosis. Prueba positiva
Colocar siembra en una jarra de anaerobiosis y observar si hay crecimiento. Prueba negativa
Objetivo
Siembra de la bacteria
Esterilización
Tinción simple
Tinción de Gram
Tinción de flagelos
Catalasa
Oxidasa
Movilidad (MIO)
Producción de ácido a partir de glucosa
Crecimiento aerobio
Crecimiento anaerobio