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Técnicas de identificação dos Cromossomos.
Citogenética Clássica:
Bandeamento:
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Mais usado frequentemente nos laboratórios. Para desnaturar as proteínas é usado a Tripsina e o corante usado é a Giemsa.
As bandas escuras são presentes nas regiões ricas em AT e as Bandas claras, regiões ricas em CG. Vantagens: Custo baixo e boa durabilidade das bandas
Foi o primeiro método de marcação desenvolvido. Os corantes usados são os fluorocromos corantes fluorescentes o primeiro corante utilizado foi Quinacrina mostarda.
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Vantagens: Possui intensa marcação do cromossomo Y Desvantagem: maior custo, fluorescência não é permanente, microscópio de fluorescência.
- BANDEAMENTO R:
Pode ser chamado também de bandeamento das Bandas reversa ou Q – isso porque diferentemente dos bandeamentos G e Q ele deixa as bandas claras e isso acontece porque se Desnatura com calor.
É utilizado 2 tipos de corantes como o Acridina laranja ou Giemsa. Bandas Fluorescentes e escuras são regiões ricas em CG e bandas Opacas e claras são regiões ricas em AT.
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Heterocromatina, são materiais genéticos não codificastes, pois não participa, da transcrição, são inativos, são as região centromérica/ Região pericentromérica.
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Vantagens: Detecção de cromossomos dicêntricos e pseudodicêntricos, diferenciação do cromossomos 8 e 9
Ocorre nas regiões organizadoras de nucléolos mais especificamente nos acrocêntricos, apenas eles são possuidores da Constrição secundária e dos satélites.
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. Proteínas presentes nas RONs tem afinidade por prata por esse motivo recebem um tratamento por nitrato de prata.
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Desnatura com calor e vai corar com Giemsa. Telômeros, são termorresistentes por isso não desnaturam.
Os Telômeros são responsáveis pelo envelhecimento celular, na replicação eles ficam tão pequenos que chegam a morte celular.
Teoria dos telômeros que explica a Síndrome conhecida por Progeria ou Síndrome de Hutchinson-Gilford
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Cromossomos sexuais, alossômicos, heterossômicos:
Determinam características sexuais. Sendo 1 par e 2 cromossomos.
Nos seres humanos, os cromossomos medem em geral de 4 a 6 µm de comprimento. Existem espécies, dotadas de cromossomos que atingem grandes tamanhos, sendo, eles denominados cromossomos gigantes.
Plumosos ou plumados: chegam a atingir 800 µm de comprimento e estão presentes em (Anfíbios, Peixes e Invertebrados em geral)
Politênicos ou multifilamentosos: eles podem atingir 150 a 250 µm de comprimento são cromossomos presentes em (Moscas e Mosquitos)
Citogenética Molecular:
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- FISH: Hibridação in situ por fluorecência :
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1- É realizada a produção de uma sonda de DNA em laboratório com sequência genética conhecida complementar a uma região especifica a u cromossomo conhecido.
2- Pega a Sonda marca com fluorescência e junta a amostra do paciente, se essa sonda no momento da replicação encontra complementariedade
3- Ela vai se ligar ao material genético testado e emite fluorescência, isso significa que a sonda de DNA que foi produzida encontrou complementariedade
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- SKY – (Spectral Karyotyping)
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Utilizam uma combinação de fluorocromos que emitem comprimentos de ondas distintos, cada um dos 24 cromossomos emite seu próprio espectro.
24 cromossomos por causa dos sexuais, porém no caso do sexo feminino são 23 cromossomos
- CGH – (Hibridização genômica Comparativa)
Método citogenético molecular com o potencial de detectar desarranjos cromossômicos previamente inacessíveis (não conseguia ser visualizado sob microscópio).
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1- Consiste em uma marcação de DNA teste marcado com um tipo de fluorescência e um DNA normal(tumoral) conhecido, marcado com outro tipo de fluorocomo, serão misturados e colocados em um grupo de células metafasicas normais...
2- Em seguida observar a fluorescência. Caso haja uma maior fluorescência no DNA teste ou tumoral quer dizer que aquele material genético ganhou quantidade de informação genética por isso está mais enfatizado.
3- Mas se o DNA normal marcado com fluorocomo tiver a liberação de uma maior quantidade de fluorescência quer dizer que perdeu material genético.
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