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TECNICHE CENTRIFUGATIVE - Coggle Diagram
TECNICHE CENTRIFUGATIVE
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APPLICAZIONE TECNICHE CENTRIFUGATIVE
- Raccolta di cellule da terreni e preparati biologici.
- Frazionamento cellulare (= separazione in organuli. Ad es.: nuclei,
mitocondri, microsomi, ecc.).
Si realizza mediante: centrifugazione
frazionata o centrifugazione in gradiente di densità.
- Precipitazione di macromolecole in condizioni di insolubilità. In condizioni denaturanti (precipitazione di proteine o di acidi nucleici in TCA e precipitazione di acidi nucleici in etanolo) oppure in condizioni non denaturanti (precipitazione di proteine in solfato d’ammonio).
- Concentrazione di soluzioni (centricon)
- Determinazione della massa molecolare di macromolecole mediante ultracentrifugazione analitica.
TIPI DI CENTRIFUGHE
da banco
- velocità max 3000-7000 xg
- refrigerate o non (allora in camera refrigerata)
- le + grandi con diversi rotori
- per raccolta materiale che sedimenta velocemente (lievito, eritrociti, etc.)
- comprendono microfuge: max velocità 10 000xg
ad alta velocità
- velocità max 60 000xg
- rotori sia ad angolo fisso che oscillante
- raccolta di microorganismi e frammenti cellulari e organuli grandi
ultracentrifughe
- velocità max 600 000xg
- camera del rotore sotto vuoto per diminuire attrito
- albero motore flessibile per minimizzare vibrazioni da sbilanciamento
- rotore in titanio
- frazionare componenti subcellulari
TIPI DI ROTORI
- a bracci oscillanti
- ad angolo fisso
- con provette ad alloggiamento verticale
- zonali
- elutriatore
rotori ad angolo fisso
- angolo compreso fra 14-40°
- alloggiamenti per tubi disposti circolarmente attorno ad asse di rotazione ad angolo prefissato
- formazione di un pellet inclinato di 45°, che aiuta estrazione del surnatante
rotori ad bracci oscillanti (swing out)
- provette oscillano sino a d essere in linea con campo di centrugazione
- il pellet si sedimenta orizzontalmente, utile per gradiente di densità
- a bassa velocità: in ottone, acciaio o perspex
- alta velocità: alluminio o titanio
in ogni caso deve essere bilanciato
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