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TÉCNICA HISTOLOGICA image - Coggle Diagram

- - - - Lo que sigue es armar un taco de parafina con la muestra, se saca la muestra de la estufa y con una pinza (la cual se debe calentar un poco) se debe orientar la muestra dentro de la parafina, se la aprieta contra el borde de manera orientada. Se debe esperar a que la parafina se enfie, este proceso se puede acelera si metemos la parafina en una heladera.
        
        Una vez fría la parafina lo que sigue es preparar el taco, se debe montar la parafina con la muestra en un taco de madera o celdillas para una muestra. Se calienta un cuchillo con el mechero y cortamos la parafina para hacer el taco, las caras deben quedar prolijas, lo que sigue es unir la parafina a un taco, se calienta el cuchillo y con este se calienta la superficie se la parafina para unirla al taco, una vez terminado el taco se guarda en la heladera.
    - - Tinción o coloración, los colorantes son necesarios para poder ver con claridad los componentes de los tejidos, además nos permite diferenciar los componentes celulares (núcleo, citoplasma gránulos secretores, etc.) y matriz extracelular (colágeno, elásticas, amiloide, etc.)
        
        Con el corte de parafina totalmente seco se inicia la tinción, se usa la hematoxina con base acuosa, la hematoxilina está en agua la cual no es soluble en la parafina. Lo que se debe hacer quitar la parafina de la muestra (DESPARAFINACION), usamos el xilol para quitar la parafina, pasa por xilol-1, luego a xilol-2, por un tiempo alrededor de 5 minutos en cada uno, se debe trabajar en una campana porque los solventes son tóxicos, el siguiente paso es HIDRATAR, lo que se hace es pasar por alcohol 100 para quitar el xilol de la muestra, pasa por alcohol 100-1 y luego por alcohol 100-2 ambos por un tiempo de 5 minutos, con estos pasos terminamos de sacar el xilol de la muestra. Lugo se sacar del alcohol 100-2 empezamos a hidratar los cortes, pasamos por el alcohol 96-1, alcohol 96-2.
        
        Posteriormente pasamos a alcohol 70-1. Este procedimiento se lo hace de manera gradual para que no sea brusco. Del alcohol 70 podemos pasar a la hematoxilina, la hematoxilina será atraída por las cargas negativas del tejido (ADN del núcleo, ARN ribosomal matriz extracelular, moco de tejido, matriz del cartílago). Debemos dejarla alrededor de 10 minutos. Luego los cortes los pasamos en AGUA DE CANILLA, la cual vira la hematoxilina a color violeta oscuro.
        
        Tinción con EOSINA. Ponemos los cortes en la eosina, la que nos da un color rosado, tiñe los citoplasmas, retículo endoplasmático liso, mitocondrias, fibras colágenas, matriz de cartílago. Es un colorante ácido y es atraído por todas las cargas positiva, es una coloración rápido se la debe dejar alrededor de 2 minutos. La eosina es un colorante en base de alcohol, lo que hace el alcohol es deshidratar el corte.
    - - El propósito es
        
        Frenar la degradacion - evitar difusión de péptidos o proteínas hacia afuera o dentro de la célula - Fortalecer el tejido para soportar los efectos deléteoros e los tratamientos de la técnica histológica - Preservar el tejido en forma similar a su estado vivo.
      - El tejido obtenido por: biopsia (in vivo) o necropsia (post mortem), de un animal o ser humano. La muestra de tejido se la coloca en un líquido fijador (el más usado es el FORMOL).
        
        La muestra del tejido debe ser recortada para entrar en un portaobjetos. Como los fijadores tienen agua lo que se debe hacer es quitar el agua de la muestra (DESHIDRATACION). Se pone la muestra en un aparato para poder manipularla de manera cómoda (destilador), luego se debe pasar la muestra por alcoholes de diferentes gradaciones.
        
        se pone la muestra en el primer frasco (alcohol 70-1), cuanto mas grande mas tiempo se deja en los frascos, más pequeño menos tiempo. Luego pasa al segundo frasco (alcohol 70-2), hay dos frascos con la misma gradación de alcohol porque el primero es el más sucio y el segundo mas limpio. Luego pasa al tercer frasco (alcohol 96-1). Una vez que haya pasado por el alcohol 96-1 y alcohol 96-2 pasa el alcohol 100-1, el alcohol 100 no tiene agua, y finalmente pasa por el alcohol 100-2 (el tiempo en cada alcohol variara del tamaño de la muestra)
        
        Ahora la muestra debe ser fijada en parafina, la cual no es soluble en alcohol, la muestra debe pasar por un solvente intermedio (XILOL). El paso se llama DIAFANIZACION EN XILOL, la muestra pasa por xilol-1, posteriormente por xilol-2, la importancia de este paso es transparentar la muestra, pasa de un color opaco a un color caramelo, el xilol solo actúa de manera correcta cuando el tejido no tiene agua, esto ocurre si no se siguió de manera correcta la deshidratación
        
        El siguiente paso es la inclusión de la muestra en PARAFINA, la muestra debe de estar limpia, para poder poner la muestra en la parafina, la parafina debe de estar en estado líquido (lo que se logra poniendo la parafina solida en una estufa). La muestra se la pone en parafina liquida, se la deja en la muestra en la parafina dentro de la estufa durante toda la noche, la estufa evapora el xilol mientas esto sucede la parafina se incluye al tejido.
    - - Una vez terminado se lleva el taco al MICROTONO, el lado de la madera va dentro del porta espécimen del microtomo, las maderas deben tener el tamaño exacto para ir dentro del porta espécimen del microtono.
        
        La muestra se coloca en el porta objetos (portabloque), el microtono realiza cortes histológicos, la navaja debe ser colocada en el porta navaja, la navaja es muy filosa y debemos de ser cuidadosos con no cortarnos. se calcula el grosor del corte con el regulador que se encuentra en micras. Con cada giro que se realiza se corta una parte del especien, avanza dependiendo del grosor que regulamos en microtono. Se avanza el porta navaja para orientar el plano de corte con la cuchilla. El porta espécimen tiene perillas las cuales sirven para orientar, se debe dejar la muestra paralela a la cuchilla, una vez orientada la muestra se aseguran las perillas.
        
        Se desgasta el taco (muestra), hasta llegar al punto exacto donde obtengamos tiras con el tejido. Una vez que tengamos el tejido rodeado de parafina ya podemos realizar los cortes para los portaobjetos. Si el corte es grueso se observan más células y cuanto más delgado es el corte la muestra es más nítida
        
        Una vez obtenida una tira con cortes se los retira del microtono. Posteriormente tiras se quita el taco del microtono. Lo que sigue es montar el corte en un portaobjeto, se usa un baño de agua caliente, la parafina se derrite pasando una temperatura aproximada a los 58°, esto difiere del tipo de parafina que se use. Lo que se busca con el baño de agua es estirar la parafina y quitarle los pliegues, se toma un corte de la tira que obtuvimos del microtono, se extiende la muestra en el agua y con un portaobjetos montamos la muestra con mucho cuidado.
    - - debemos de cubrir el corte con un cubre objetos, el cubre objetos es un vidrio fino el cual dependerá en tamaño con el porta objetos. La muestra de corte que se encuentra en eosina aun contiene agua, lo que se debe de hacer es quitar toda el agua del corte. Pasamos por eosina 96-1 a eosina 96-2, pasamos a alcohol 100-1 el que termina de sacar el agua a el corte finalmente pasa por alcohol 100-2 y termínanos de DESHIDRATAR. Pasamos por xilol-1, xilol-2. El xilol transparenta el tejido (DIAFANIZACION), también permite quitar el alcohol 100 del corte.
        
        . Finalmente se debe colocar el cubre objetos, para ello se usa BALSAMO SINTETICO, el cual es un pegamento que sirve para pegar el cubre objetos sobre el porta objetos. Debemos de orientar de manera correcta el corte, usamos una gota de bálsamo, pegamos el cubre objeto quitando las burbujas y expandiendo el bálsamo. Limpiamos el restante de bálsamo. Y el corte finalmente esta listo para poder ser usado.